[发明专利]MCV分析中的稀释剂以及确保其具有不随时间变化的一致性的方法

说明书

本发明涉及分析血样中的平均红细胞容积(MCV)，特别是涉及一种用颗粒分析仪在进行MCV分析的过程中使用的试剂和方法。

现在，临床检查领域广泛使用了自动血液分析仪。作为医疗诊断过程中对病人作检查的装置，它们被设计为可对血液成分进行快速分析。这些装置能够进行全部血球数(CBC)的多种分析，包括诸如红血球(RBC)数、白血球(WBC)数、白血球分类、血红蛋白浓度(Hb)、血细胞比容(Ht)和血小板数(PLT)这些项目。

MCV是从这些细胞分析值中计算得到重要项目中的一项。MCV可以由血细胞比容被红细胞数所除，就是Ht/RBC值而得到，血细胞比容就是一个单位容积的全血中红血球的百分含量。那么MCV就是单个红血球的平均容积，相应的其单位是fL、飞升、或10^-15L。

上述血液分析仪采用流式血细胞计数器。在流式血细胞计数器中，稀释后的血液以高速通过一个非常细小的喷嘴导入流动槽，并且，喷嘴导出的液流被包覆液体(层流)的圆柱形流所包围。通过使该层流变窄，可以由此将样品流聚集至如下程度，即该样品流基本上呈一个细胞接一个细胞的线性序列。从而这些样品流中细胞的通过被该层流控制，通过采用激光照射液流，用光学方法检测该细胞，以及通过测量电阻和电导率，用电学方法检测该细胞。

为给上述的血液分析仪中使用的流式血细胞计数器分析制备全血样品，样品一般必须使用抗凝剂如EDTA盐处理，并用生理等渗溶液稀释。

作为用来稀释整个血液的稀释剂，一般有如下溶液例如生理盐水、林格式溶液(Ringer’s solution)、洛克式溶液(Lock’s solution)和台罗德式溶液(Tyrode’s solution)。在前述血液分析器的分析过程中也可以使用上述稀释剂。然而通常，每台分析仪选用最佳稀释剂。

在制备MCV分析的全血样品过程中，目前技术上存在的主要问题是实际的MCV会随血液采集后经历的时间而改变。临床诊断中MCV值是必要而又重要的，它应在血样采集后立即获得，也就是，该值应当与原始血液的MCV值相一致。

实践中，作为CBC一部分的MCV值直到采集血样72小时后才会被测量。而此时这样的血样再也不能产生适宜的MCV分析值了。血液采集后，样品中的RBC膨胀，使得经过采集后的经历时间所测得的MCV值渐渐大于原始RBC的平均容积。原始MCV才是诊断所需的真正测量。

日本专利公告8-33388(1996)，日本专利公告7-82010(1995)和日本专利申请公开8-122327(1996)公开了各种含有非离子型表面活性剂的水溶液。然而，不管这些溶液中的哪一种用作流式血细胞计数器的包覆液，都需要在流动腔内加入非离子型表面活性剂以消除气泡。

另外，日本专利公告1-33780(1989)公开了一种稀释剂，在其中加入一种非离子型表面活性剂以抵销防腐剂对红细胞的影响，最终目的是在所测的MCV中抑制由于防腐剂而产生的稀释后的变化。然而，日本专利公告1-33780没有公开在所测的MCV中抑制因为血样采集后的经历时间而产生的变化的方法。

如果能找到一种在血液采集72小时后测得的血细胞比容和红细胞数与血样原始值一致的方法，这将是本领域中的重要进步。

本发明使得采集后的血液经过一段时间后分析仍能产生一个与该样品原始值非常一致的MCV值，也就是与采集后立刻测量的MCV值相一致。

根据本发明的试剂是一种血样的水稀释溶液，它包括在有限的浓度范围内加入少量的预定表面活性剂。用合适的物质将该试剂的渗透压调至预定范围。

用于本发明的试剂是一种水溶液，它包括非离子型表面活性剂和用于将渗透压(π)调至大约150-400mOsm/Kg的一种盐或合适的物质。

该试剂优选的渗透压(π)大约是230-350mOsm/Kg；特别优选的是大约260-320mOsm/Kg的渗透压(π)。本发明实施例中的非离子型表面活性剂的例子可以是下面任何一个。

     (1)

R-O(CH₂CH₂O)_nH

     (2)

R-COO(CH₂CH₂O)_nH

      (3)R-COO(CH₂CH₂O)_nCO-R