[发明专利]有效检测丙型肝炎病毒(HCV)的寡核苷酸引物及其应用方法

权利要求书

1、一种检测生物样品中丙型肝炎病毒(HCV)RNA存在的方法，该方法包括：

(A)用来源于所说样品的RNA作为模板进行逆转录反应以产生HCV特异性逆转录产物；

(B)用HCV特异的一对或多对寡核苷酸引物扩增所说的逆转录产物，以产生HCV特异性扩增产物，

其中所说引物对选自以下序列：

(a)正向引物5’-CAGAAAGCGTCTAGCCATGGCGTTAGTA-3’(C69F28)<SEQ ID No.1>和反向引物5’-CGGTTCCGCAGACCACTATGGCTCTC-3’(C133R26)<SEQ ID No.4>，或者

(b)正向引物5’-GGGAGAGCCATAGTGGTCTGCGAA-3’(C131F25)<SEQ ID No.2>和反向引物5’-CGGGGCACTCGCAAGCACCCTATCA-3’(C294R25)<SEQ ID No.7>，以及

(c)正向引物5’-GTGGTCTGCGGAACCGGTGAGTACAC-3’(C143F26)<SEQ ID No.3>和选自以下序列的反向引物：

(i)5’-GCAAGCACCCTATCAGGCAGTACCACA-3’(C282R27)<SEQ IDNo.5>，

(ii)5’-CACTCGCAAGCACCCTATCAGGCAGTA-3’(C287R27)<SEQ IDNo.6>；

(C)检测所说的扩增产物，

其中检测到所说扩增产物表明所说样品中HCV RNA的存在。

2、一种如权利要求1所限定的方法，其中所说逆转录反应采用随机寡核苷酸引物进行。

3、一种如权利要求1所限定的方法，其中所说逆转录反应采用具有相应于HCV RNA序列之序列的一个或多个寡核苷酸引物进行。

4、一种如权利要求1所限定的方法，其中所说的扩增用选自下述的方法进行：PCR、连接酶链式反应、链置换扩增、核酸单碱基取代、转录介导扩增。

5、一种如权利要求1所限定的方法，其中所说的检测包括用凝胶电泳显示所说的扩增产物。

6、一种如权利要求1限定的方法，其中所说的检测包括在含有一个或多个HCV特异寡核苷酸探针的固相支持物上俘获所说的扩增产物，以及用比色分析法定量所说的俘获产物。

7、一种如权利要求6限定的方法，其中所说的探针包括选自以下序列中的一个：

(a)5’-TTTCGCGACCCAACACTACTCGGCT-3’(C252-25-PRB)<SEQ IDNo.13>，

(b)5’-CCTTTCGCGACCCAACACTACTCGGCT-3’(C252-27-PRB)<SEQ IDNo.12>，所说的正向引物是(C131F25)或者(C143F26)；

其中所说的探针包括；

(c)5’-GGGTCCTGGAGGCTGCACGACACTCAT-3’(C96-22-PRB)<SEQ IDNo.11>，所说的正向引物是(C69F28)。

8、一种如权利要求1限定的方法，其中所说的样品选自血液、血清、血浆、尿、唾液和脑脊液。