[发明专利]血液中的幽门螺杆菌抗原

说明书

本发明涉及在血液(包括全血、血浆及血清)中对幽门螺杆菌(H.pylori)抗原及其抗原片段的发现。发现于血液中的幽门螺杆菌抗原包括但不限于幽门螺杆菌DNA、RNA或其片段、或者幽门螺杆菌蛋白/肽或其其它抗原组分。幽门螺杆菌DNA或其片段由聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)、DNA杂交、分支DNA信号放大检测或其它信号放大方法进行检测。其幽门螺杆菌RNA由PCR、杂交或其它信号放大检测方法检测。幽门螺杆菌蛋白或肽或其其它抗原组分由免疫检测或免疫印迹实验用对幽门螺杆菌的亲和纯化抗体来检测。本发明还涉及通过检测血液中的幽门螺杆菌抗原来诊断幽门螺杆菌感染。

幽门螺杆菌(H.pylori)是革兰氏阴性细菌，其侵染胃粘膜并且是多数消化性溃疡病(PUD)的诱因。至今为止，溃疡及其它形式的消化不良被认为与应激反应水平或饮食习惯有关。最近，医学界已确认幽门螺杆菌是某些形式的胃疾病包括溃疡和胃癌的诱发剂。根除幽门螺杆菌促进了溃疡的愈合并大大降低了癌症和PUD的发病率。

幽门螺杆菌引起大部分胃和十二指肠溃疡以及消化性溃疡病(PUD)。幽门螺杆菌和PUD的联系最先由澳大利亚医生Warren和Marshall于1984年发现(LancetI：1311-1344)。现在，幽门螺杆菌感染被看作是胃炎的最常见病因，且从病因学角度讲，其与胃溃疡、十二指肠溃疡、胃腺癌和原发B细胞淋巴瘤有关。

现已证实，PUD是可治愈的，且相当容易。多数PUD的病因是幽门螺杆菌感染。但是，幽门螺杆菌感染不能常规诊断，这可能是因为检测幽门螺杆菌的方法(即侵入性活组织检查)不能使医生特别是主治医师满意。因此，主治医师倾向于用抗分泌剂来治疗病发的患者。

医生需要一种简单、准确且廉价的诊断幽门螺杆菌感染的方法，以便使他们知道何时治疗病人以及何时将病人引见给胃肠病学家。但是，目前的幽门螺杆菌检测，可以归类为侵入性检查和非侵入性检查，它们都不能令人十分满意。

侵入性检查需要先使用内窥镜然后进行活组织检查。对由活组织检查方法获得的组织样本，再通过培养、组织学或快速尿素酶实验进行分析。

虽然对活组织检查样本的培养为幽门螺杆菌检验提供了最可靠的结果，但是在较好的实验室中报告的成功率仅在70％至80％之间(Han，S.W.等，Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis.(1995)，14：349-352)。对特殊染色的活组织检查样本的检查可以为急性或慢性炎性粘膜细胞和损伤提供直接的证据。但是，这需要内窥镜医生和病理医生的合作(Genta，R.M.等，Hum.Pathol.(1994)，25：221-226)。快速脲酶检验检测由幽门螺杆菌脲酶产生的氨引起的pH升高，该脲酶将脲分解为氨和二氧化碳。但是，其需要高密度的细菌，且降低该细茵量的任何事件都会造成假阴性结果(Cutler，A.F，Am.J.Med.(1996)，100：35S-39S)。

自1990年以来，已开发了一些非侵入性检验方法来检查幽门螺杆菌感染的存在。例如，尿素呼吸实验是基于此生物体的脲酶活性，该脲酶将用¹³C或¹⁴C标记的脲分解为非放射性¹³CO₂或放射性¹⁴CO₂。此脲呼吸实验被广泛推荐用来证实在治疗4周后对幽门螺杆菌的根除。

美国专利5,716,791、5,871,942和5,932,430公开了用多克隆抗体检测粪便样本中幽门螺杆菌抗原的免疫检测方法，其中多克隆抗体得自用幽门螺杆菌细胞(即ATCC株43504)致敏的动物。此抗体通过DEAE(二乙基氨基乙基纤维素)柱纯化。虽然此粪便抗原检验据报告是令人满意的，但是发现粪便样本的收集和处理是困难且令人不快的。很多患者不愿意给医生提供粪便样本，是由于令人不快的气味和缺乏方便的收集器具。