[发明专利]欧米加－海螺毒素变体多肽的基因序列、氨基酸序列以及它们的制备方法和医药用途

权利要求书

1．一种欧米加-海螺毒素变体多肽的氨基酸序列Ⅰ，其特征在于将天然欧米加-海螺毒素的第12位的甲硫氨酸(Met)改为丙氨酸(Ala)，其氨基酸序列Ⅰ为：

1       5       10        15        20      25

C K G K G A K C S R L A Y D C C T G S C R S G K C

2．一种欧米加-海螺毒素变体多肽的氨基酸序列Ⅱ，其特征在于将天然欧米加-海螺毒素的第12位的甲硫氨酸(Met)改为甘氨酸(Gly)，其氨基酸序列Ⅱ为：

1       5        10        15       20      25

C K G K G A K C S R L G Y D C C T G S C R S G K C

3．一种欧米加-海螺毒素变体多肽的氨基酸序列Ⅲ，其特征在于将天然欧米加-海螺毒素的第12位的甲硫氨酸(Met)改为亮氨酸(Leu)，其氨基酸序列Ⅲ为：

1       5        10        15       20       25

C K G K G A K C S R L L Y D C C T G S C R S G K C

4．一种欧米加-海螺毒素变体多肽的氨基酸序列Ⅳ，其特征在于将天然欧米加-海螺毒素的第12位的甲硫氨酸(Met)改为异亮氨酸(Ile)，其氨基酸序列Ⅳ为：

1       5        10        15       20       25

C K G K G A K C S R L I Y D C C T G S C R S G K C

5．一种欧米加-海螺毒素变体多肽的氨基酸序列Ⅴ，其特征在于将天然欧米加-海螺毒素的第12位的甲硫氨酸(Met)改为缬氨酸(Val)，其氨基酸序列Ⅴ为：

1        5       10       15       20       25

C K G K G A K C S R L V Y D C C T G S C R S G K C

6．翻译产物的氨基酸序列分别为序列Ⅰ，序列Ⅱ，序列Ⅲ，序列Ⅳ，序列Ⅴ的DNA序列。

7．用原核或真核细胞表达系统制备欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽。

8．一种欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的制备方法，其特征在于在DNA水平上，将欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的基因串联成多聚体，用原核或真核表达系统制备欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的串联多聚体。

9．按权利要求书8所述的欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的制备方法，其特征在于利用DNA限制性内切酶中的同尾酶具有识别和水解不同核苷酸序列，但产生相同的粘性末端，且当二者的粘性末端相连后不能再被同尾酶识别及切割的特点，在MVIIA及其变体基因DNA序列的5’端及3’端分别加上同尾酶的识别序列，通过重复用同尾酶水解，连接反应等步骤，构建MVIIA及其变体基因的串联多聚体。

10．按权利要求书8所述的欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的制备方法，其特征在于根据欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的氨基酸及DNA序列的特点，在构建其基因的重复串联多聚体时利用同尾酶本身的识别序列，或在同尾酶识别序列的5’端或3’端加入适当的核苷酸序列，从而使串联重复的各MVIIA及其变体单体基因间存在特定的间隔序列，这些间隔核苷酸序列在翻译成氨基酸后，成为将欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的多聚体加工成单体多肽的断裂、加工位点。

11．按权利要求书10所述的欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体多肽的制备方法，其特征在于用化学或酶学方法将欧米加-海螺毒素(MVIIA)及其变体基因的串联多聚体的表达产物，即多肽的串联多聚体断裂或切割，加工成单体多肽。