[发明专利]一种新的多肽——人EF－手型钙结合蛋白42和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人EF-手型钙结合蛋白42，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞液中钙离子浓度的变化引起了广泛的细胞反应。细胞内的钙结合蛋白是通过酶反应或蛋白与蛋白的相互作用调节来传导钙信号中的关键分子。它们中的一些在细胞周期中作用，或作用于细胞分化。被第二信号分子(如肌醇三磷酸)刺激后，它们短暂地从内质网释放到周围的细胞质中。相似的生理过程在核膜破裂和有丝分裂后期的染色单体分离中亦发生。

许多钙结合蛋白均属于同一进化家族，且含有一共同的钙结合结构域，即EF-手型结构域。这些蛋白构成了一很大的蛋白家族，即EF-手型钙结合蛋白家族。该蛋白家族的成员分布非常广泛，这些蛋白均在细胞生长及分化过程中起重要的作用，调控着细胞循环及控制着生物体的新陈代谢过程。

EF-手型结构域包含一个12个氨基酸残基组成的环，这个环通过一个12个氨基酸残基的α螺旋区域向两边伸展，组成约成90度的角。在EF-hand环中，钙离子结合于一个五边形的双锥状的构象中。涉及结合的6个残基在1,3,5,7,9和12位。12位上保守的Glu或Asp提供与Ca配位的两个氧原子(双配位基配体)。

EF-手型钙结合蛋白在该家族中的分布较多，该类钙结合蛋白具有如下保守的一致性序列片段：[LIVMFYW](2)-X(2)-[LK]-D-X(3)-[DN]-X(3)-[DNSG]-[FY]-X-[ES]-[FYVC]-X(2)-[LIVMFS]-[LIVMF]；所有EF-手型钙结合蛋白均具有这一一致性序列片段，而非EF-手型的蛋白中不含有这一序列片段。该序列片段包含有EF-手型的高亲和区域，但这一位点不具备钙结合特征。其不是蛋白与钙结合的中心位点，但在生物体内调节着蛋白与钙离子的亲和作用。通过该位点来调节蛋白与钙离子间的相互作用，以形成具有作用活性的蛋白构型，在生物体内发挥其生理学功能。

本发明的新的人EF-手型钙结合蛋白与鼠R2D5抗体蛋白在蛋白水平上有32％的同一性和56％的相似性，其蛋白序列中亦含有一EF-手型钙结合蛋白保守的一致性序列片段，因而，其为钙结合蛋白家族的新成员，且与该蛋白家族的其它成员具有相似的生物学功能。鼠R2D5抗体蛋白在嗅感受神经元及中枢神经系统室管膜细胞中有较高的表达量，其在体内通常与嗅感受信号的转导及中枢神经系统的发育等过程相关[Nemoto Y.,Ikeda J.et a1.,199 3,J Cell Biol,123:963-976]。本发明的新的蛋白在生物体内调控着中枢神经系统细胞的生长及分化，并调节着生物体的嗅觉感受过程。其表达异常将引发各种相关的神经系统发育紊乱性疾病、嗅觉系统疾病及一些相关组织的发育紊乱症等。该蛋白还可用于上述各种疾病的诊断与治疗。

由于如上所述人EF-手型钙结合蛋白42蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人EF-手型钙结合蛋白42蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人EF-手型钙结合蛋白42蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人EF-手型钙结合蛋白42以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人EF-手型钙结合蛋白42的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人EF-手型钙结合蛋白42的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人EF-手型钙结合蛋白42的方法。 

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人EF-手型钙结合蛋白42的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人EF-手型钙结合蛋白42的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人EF-手型钙结合蛋白42异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。