[发明专利]一种新的多肽——人还原剂与衣霉素应答蛋白40和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人还原剂与衣霉素应答蛋白40，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

高胱氨酸过量是引起动脉硬化和血栓的一个危险因子。高胱氨酸会引起内皮细胞的损伤或机能不良，从而引发动脉硬化和血栓。在用高胱氨酸刺激人脐带动脉血管内皮细胞时，可以观察到某些基因表达发生了变化。有一些基因呈正调控，另一些呈负调控。一种正调控基因是GRP78/BiP，这是一种位于内质网的分子伴娘。这意味着高胱氨酸引起的氧化还原电位的变化会引起内质网中未折叠的蛋白的聚集。另一种正调控基因编码一种双功能酶，与高胱氨酸的代谢有关。第三种正调控基因编码一种活化转录因子4。【Methods 1998 Dec；16(4):434-43】

还原剂与衣霉素应答蛋白(reducing agent and tunicamycin-responsiveprotein,RTP)也是一种在高胱氨酸刺激时起正调控作用的蛋白。Northern杂交发现RTP mRNA不但在高胱氨酸刺激的脐带动脉血管内皮细胞中表达，而且用巯基乙醇和衣霉素刺激时也会产生RTP mRNA。现在已经知道巯基乙醇和衣霉素都会引起内质网的收缩。RTP mRNA不仅在人成熟器官中广泛表达，在鼠类的胚胎发育中也受到调控。【Methods 1998 Dec；16(4):434-43】这一结构显示了RTP蛋白在动脉粥样硬化中的作用。

在对RTP在胎盘中表达的研究发现，RTP mRNA在合胞体滋养层中表达量最高。在BeWo细胞中RTP基因的表达是蛋白激酶C依赖的。这一结果表明RTP可能在滋养层细胞的增殖和分化中起一定作用。【Biol Reprod 1999 Sep；61(3):681-6】

本发明的多肽在蛋白水平上与在人中发现的RTP蛋白有65％的同源性。因此是一种新的RTP蛋白，并推定有相似的生物学功能。本发明命名为人还原剂与衣霉素应答蛋白XX。

由于如上所述人还原剂与衣霉素应答蛋白40蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人还原剂与衣霉素应答蛋白40蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人还原剂与衣霉素应答蛋白40蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人还原剂与衣霉素应答蛋白40以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人还原剂与衣霉素应答蛋白40的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人还原剂与衣霉素应答蛋白40的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人还原剂与衣霉素应答蛋白40的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人还原剂与衣霉素应答蛋白40的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人还原剂与衣霉素应答蛋白40的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人还原剂与衣霉素应答蛋白40异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中84-1175位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2588位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。