[发明专利]一种新的多肽——钙粘蛋白63和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--钙粘蛋白63，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

钙粘蛋白是一种动物的跨膜糖蛋白家族，对钙依赖的细胞与细胞之间的粘附有作用，通过Ca²⁺依赖机制介导发育及成熟的组织中的附着反应。钙粘蛋白在相连的细胞中以同种分子间的粘着方式优先与同类细胞相互作用，作为受体及配体同时作用。现已知钙粘蛋白为数众多的组织特异性形式。N-钙粘蛋白在神经系统发育时作为神经纤维生长的强效介质作用，此外它还在心脏及骨架肌肉和透镜状细胞中表达。E-钙粘蛋白是上皮细胞中的成分，神经管形成时，神经脊亦随之产生，外胚层分化的神经脊的细胞区域停止表达E-钙粘蛋白，转而表达N-钙粘蛋白，单N-钙粘蛋白表达是暂时的，当神经脊细胞开始迁移时，所有的钙粘蛋白的表达停止，因此，这些细胞与内胚层细胞(表达E-钙粘蛋白)和神经管细胞(表达N-钙粘蛋白)均产生差别。细胞粘连蛋白的失去对于细胞迁移是必需的，一旦神经脊细胞到达目的地，形成神经节，在分化神经元的同时，重新表达E-钙粘蛋白，这时E-钙粘蛋白有助于将神经节中的神经元粘连在一起。P-钙粘蛋白存在于胎盘中。T-钙粘蛋白在胚胎发育的神经纤维生长模式的建立中起重要作用，在血管及肌肉细胞中也含有T-钙粘蛋白。在细胞分化过程中，细胞表面钙粘蛋白质和量的变化对细胞间粘连和细胞迁移有多方面的影响。有些钙粘蛋白是上皮细胞的主要粘连分子。在低等脊椎动物中，这些钙粘蛋白就象胶一样将上皮细胞粘连在一起，加入钙粘蛋白抗体或除去Ca²⁺均可破坏细胞间的粘连。细胞与细胞接触的形成和破坏是细胞分化和组织形态发生许多步骤中的关键。钙粘蛋白在这一过程中起重要作用。受精卵经过几次分裂形成桑椹胚，这一阶段表达的主要细胞粘连分子是钙粘蛋白，它对细胞粘连成紧密的细胞团是必需的。

在结构上，钙粘蛋白由下列结构域构成：一个信号序列，后跟一条约30个残基的肽链，其后是一个约600个残基的的胞外域，再后是一个跨膜域，最后是一个约50个残基的C端胞质域。胞外域可再分为五部分：四个约含110个残基的重复序列，后跟一个含有四个保守半胱氨酸的区域。钙粘蛋白的钙结合域位于胞外域的重复序列上。钙粘蛋白在进化上与桥粒芯蛋白相关，后者是参与噬斑蛋白反应的胞间桥粒连接的成分。胞质域提供与细胞骨架网络的连接。钙粘蛋白中最为保守的区域位于C末端，这是一个重复序列的区域：[LIV]-x-[LIV]-x-D-x-N-D-[NH]-x-P，该特征序列模板包括两个保守的天冬氨酸残基与两个保守的天冬酰胺残基，这些残基与结合钙有关。在成熟的钙粘蛋白中，信号肽及前肽均被切除。

钙粘蛋白与肿瘤的血管形成、胚胎发育形态形成有关，本发明的多肽具有钙粘蛋白的结构特点，含有上述特征序列模板，该多肽及其拮抗剂，抑制剂，激动剂可用于诊断防治胚胎发育紊乱性疾病、肿瘤等多种疾病。

由于如上所述钙粘蛋白63蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的钙粘蛋白63蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新钙粘蛋白63蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--钙粘蛋白63以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码钙粘蛋白63的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码钙粘蛋白63的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产钙粘蛋白63的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--钙粘蛋白63的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--钙粘蛋白63的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与钙粘蛋白63异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；