[发明专利]一种新的多肽——衣壳蛋白VP4,13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--衣壳蛋白VP4,13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

轮状病毒是导致人类和动物严重腹泻的重要病毒。轮状病毒由双链RNA组成的11个片段的基因组组成，该基因组外面包裹了一层多聚蛋白质或衣壳。外部的衣壳蛋白由两部分组成，VP7和VP4。VP7蛋白，由RNA片段7,8或9编码，特异于G血清。VP4蛋白，是基因4的产物，负责红血球凝集和感染后反应性胰岛素增加。按照VP4序列分析和抗血清中性分析，一个人类轮状病毒VP4血清系统已经建立起来。在这个系统中，人类轮状病毒可以分为三个血清型和一个亚型。

到目前为止，人类轮状病毒类型A按照VP4基因组序列可分为五种。第一种基因组类型包括血清型G1,G3,G4和G9症状轮病毒Wa,P,VA70,W161。第二种基因组类型的代表是血清型G2系DS-1，它与第一种基因组类型有89.4-90.5％的氨基酸一致性。第三种基因组类型最常见于无症状轮状病毒血清型G1,G2,G3和G4，代表是M37,1076,McN,ST3，这几种病毒系互相之间的氨基酸一致性为95.1-97.4％，而与前两种基因组类型只有75.4-77.8％的氨基酸一致性。第四种基因类型来自于症状型轮状病毒血清型G1系K8，该类型与上述三中类型只有不到70％的氨基酸一致性。最后一种类型即第五种基因类型是症状型轮状病毒血清型G8系69M，该类型与上述四种类型有68.9-74.5％的氨基酸一致性。

人类轮状病毒基因有2359个核甘酸长，编码的蛋白质有775个氨基酸，一个长的开放阅读框。该开放阅读框开始于第22个核甘酸，终止于第2223个氨基酸。在人类VP4蛋白240和246位置，动物241和247位置都有两个保守的精氨酸。VP4蛋白的主要功能是作为红血球凝集素和在缺少其它轮状病毒外部或内部衣壳成分时保持滤过性毒菌中立状态。这表明VP4蛋白的表达是轮状病毒的构形组成和轮状病毒外部衣壳抗原性不可辩别。

本发明人的多肽具有VP4蛋白结构，属于VP4蛋白家族，并推测其具有相似的生物学功能。

由于如上所述衣壳蛋白VP4,13蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的衣壳蛋白VP4,13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新衣壳蛋白VP4,13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--衣壳蛋白VP4,13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码衣壳蛋白VP4,13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码衣壳蛋白VP4,13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产衣壳蛋白VP4,13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--衣壳蛋白VP4,13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--衣壳蛋白VP4,13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与衣壳蛋白VP4,13异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中1465-1812位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2052位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。