[发明专利]一种新的多肽——锌指结构域52和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--锌指结构域52，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

锌指结构域是核酸结合蛋白的结构，在许多核酸结合蛋白中发现含有该结构域。一个锌指结构域由25至30个氨基酸残基构成。C2H2锌指是典型的锌指结构域。其中两个保守的半胱氨酸及组氨酸都位于结构域的端部，与一个锌离子配位，其保守的序列模板为：#-X-C-X(1-5)-C-X3-#-X5-#-X2-H-X(3-6)-[H/C],X代表任何氨基酸残基，#-代表那些对于锌指稳定折叠较为重要的残基。C2H2锌指由两条短的β链后接一个α螺旋构成。螺旋的N-端部分与结合锌指的DNA主沟结合。这样一个结构域约和5个核苷酸相互作用。在C2H2型锌指蛋白ZID(带有作用域的锌指蛋白)，Ttk,GAGA,ZF5以及一组痘病毒蛋白的氨基酸末端有一段保守的特征序列模板，这一区域被称为POZ(痘病毒及锌指)域或是BTB域。ZID,Ttk以及GAGA的POZ域抑制其与DNA相关的指区域的相互作用。这种抑制作用不依赖与和其他蛋白的相互作用，也不依赖于POZ域及指区域之间的特异性作用。

BTB(BR-C,ttk及bab)或是POZ(痘病毒及锌指)域是一种保守的蛋白-蛋白作用特征序列模板，存在于部分锌指(zf-C2H2)转录因子以及与肌动蛋白相关的含有Kelch特征序列模板的蛋白与痘病毒蛋白的N-端附近。许多转录因子通过抑制基因转录而行使其功能。它们自然补充辅助蛋白的能力对于抑制基因表达是至关重要的。BTB蛋白是这类转录调节因子中的一种，它通过控制染色质构象介导基因表达。BTB域具有转录抑制活性，它把蛋白导向核的细孔状模式，并与组蛋白脱乙酰酶复合物的组分相互作用。BTB域和组蛋白脱乙酰酶复合物相连提供了连接转录因子与调节染色质构象酶活性的机制。BTB域具有典型的专性同型二聚体特征：互相紧密盘绕的同型二聚体，并具有延伸的疏水接触面，约有四分之一的单体表面涉及二聚体分子间接触。二聚体接触面上有一道暴露于表面的沟，其上排列有保守的氨基酸序列，这是BTB域与核辅抑制因子或其他核蛋白的作用位点。BTB/POZ域介导同数基因或异数基因的二聚化。二聚化的BTB/POZ域由互相紧密盘绕的同型二聚体构成。该蛋白的中心支架通过侧面被位于分子顶端及底部的短β片层包围的一簇α螺旋构成。锌指蛋白的POZ域介导转录阻抑并与组蛋白脱乙酰酶辅阻遏物复合物相互作用。

人的LAZ3/BCL6基因编码具有六个羧基端类似Kruppel的锌指以及一个BTB/POZ域，该基因编码的蛋白具有转录因子的功能，BTB/POZ域在介导该活性中起到主要作用，它是一个自主的转录阻遏域，如果缺失BTB/POZ域，将会大大减少LAZ3/BCL6的转录因子抑制功能，倘若该基因发生突变或是重排，则会引起弥散性大细胞淋巴瘤。

本发明的多肽含有BTB域以及C2H2型锌指结构，该多肽及其抑制剂拮抗剂激动剂可用于诊断防治与转录因子突变有关的癌肿或疾病，例如早幼粒细胞白血病，弥散性大细胞淋巴瘤等。

由于如上所述锌指结构域52蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的锌指结构域52蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新锌指结构域52蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--锌指结构域52以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码锌指结构域52的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码锌指结构域52的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产锌指结构域52的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--锌指结构域52的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--锌指结构域52的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与锌指结构域52异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：