[发明专利]一种新的多肽——细菌DNA再结合蛋白32和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——细菌DNA再结合蛋白32，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

DNA再结合蛋白(recA)促进和参与很多功能，包括DNA同源再结合、DNA链交换、DNA修补、DNA破损导致的SOS反应中的蛋白辅酶活性、原噬菌体感应作用等等。recA在大部分细菌组织中非常保守，现在已知的recA序列有63种。通过重要片段对比的方法对recA序列相似性进行研究，发现在氨基酸水平上，recA蛋白的序列相似程度从43％到100％不等。

通过结构、生化和突变等方面的研究，发现recA蛋白的一些重要结构和功能域，包括结合和水解ATP辅酶的部位、DNA结合域、单体-单体聚合表面、丝状体-丝状体连接部位以及和靶蛋白LexA、UmuD结合位点等等。另外也可以通过对真细菌界中的recA蛋白保守结构分析来研究顺序和功能的关系。进化为突变实验提供了一个实质有效的资料库，通过对残基位置以及结构环境的相对改变程度的比较，可以知道保守和可变残基是怎样和已知或假定功能发生联系的，也可以知道蛋白的一些其他作用。通过进化比较分析，发现E.coli的recA蛋白的一些选择性结构：1．核苷结合域A位点(NBA)，位于第66到73残基间；2．核苷结合域B位点(NBB)，位于第140到144残基间；3．其他核苷结合部，为第96、100、103和265残基；4．DNA结合域，通过紫外照射分析，得知从61到72、178到183和从233到243等残基片段为DNA结合域；5．单体一单体交互作用部位，包括5个碱性残基和1个酸性残基；6．丝状体一丝状体连接部位，从37到39残基和从298到301残基处；7．靶蛋白结合位点(TPB)，第229和第243残基。

recA蛋白有两种构像模型，活性构像受活性核苷酸所稳定，而非活性构像由ADP所稳定。通过小角度中子散射(SANS)方法，发现ADP可以象ATP一样拉长核线，尽管没有到ATP那样的程度，也表示两种以上构像的存在。

在机体内发现的本发明的多肽也含有DNA再结合蛋白(recA)的特征性保守序列，推测它们具有类似的功能，发挥着DNA调控的功能。

由于如上所述细菌DNA再结合蛋白32蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的细菌DNA再结合蛋白32蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新细菌DNA再结合蛋白32蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——细菌DNA再结合蛋白32以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码细菌DNA再结合蛋白32的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码细菌DNA再结合蛋白32的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产细菌DNA再结合蛋白32的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——细菌DNA再结合蛋白32的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——细菌DNA再结合蛋白32的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与细菌DNA再结合蛋白32异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中67-936位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1888位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。