[发明专利]一种新的多肽——RNA聚合酶PB1亚基35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--RNA聚合酶PB1亚基35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

RNA聚合酶是复杂的转录机构的核心部分，与RNA基因的转录和复制有密切关系。一些RNA聚合酶含有PB1亚基，PB1亚基首先在是流感病毒RNA聚合酶中发现的，流感病毒RNA聚合酶是一种多功能多亚基的酶，由三种滤过性毒菌P蛋白亚基组成，即PB1、PB2和PA。在RNA聚合酶PB1亚基上有两个GTP结合位点，即靠近其氨末端的的位点Ⅰ(在P1和P11b交界处)和靠近其羧末端的位点Ⅱ(在P11c上面)，两个结合位点的RNA依赖的RNA聚合酶位点位于结构上不同的区域，但各自都比较保守，它们都与RNA合成底物、引物的结合以及产物的形成有极其密切的关系。

在PB1蛋白的506-659位置以及其氨末端的78个氨基酸能够与聚合酶的其它构成部分相互作用。我们发现PB1并不是结构上独立存在的多肽链，它的N-末端和C-末端区域分别与PA和PB2两个亚基相连接，成为一个复合体结构。因此PB1不仅仅是RNA聚合酶的重要组成部分，而且还是它的核心成员，发挥着非常重要的催化功能，直接影响到病毒RNA基因的转录和复制进程。

PB1在RNA聚合酶中作为催化亚基起作用，在没有PB2和PA两个亚基存在的时候，它也能够独立催化RNA的合成，在条件适宜的情况下它还能催化RNA在体外的合成。以流感病毒为例，当细胞受到病毒感染时，流感病毒RNA基因开始在细胞内转录和复制，核蛋白(RNP)复合物(包括毒菌RNA、RNA聚合酶和核壳体蛋白)成为RNA合成的催化单位，促进整个转录复制进程的进行。

本发明的多肽含有RNA聚合酶PB1亚基特征性的结构序列，具有RNA聚合酶PB1亚基相似的生物学功能，命名为RNA聚合酶PB1亚基xx。

由于如上所述RNA聚合酶PB1亚基35蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的RNA聚合酶PB1亚基35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新RNA聚合酶PB1亚基35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--RNA聚合酶PB1亚基35以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码RNA聚合酶PB1亚基35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码RNA聚合酶PB1亚基35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产RNA聚合酶PB1亚基35的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--RNA聚合酶PB1亚基35的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--RNA聚合酶PB1亚基35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与RNA聚合酶PB1亚基35异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中134-1093位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1418位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制RNA聚合酶PB1亚基35蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。