[发明专利]一种新的多肽——人细胞周期蛋白47和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人细胞周期蛋白47，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核细胞的发育取决于依赖蛋白激酶家族(CDK)的细胞周期蛋白在合适的时间活化(Norbury,C.Nurse,P.(1992).Animal cell cycles and their control.Ann.Rev.Bio ch em.61,441-470)。CDK家族成员有同源序列，该序列包括在所有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶中发现的氨基酸残基亚型，这些氨基酸残基是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性所必须的(Meyer so n,M.,et al.,&Tsai,L.,H.(1992).A family ofhuman cdc2 related protein kinases.EMB O J.11,2909-2917)。CDKs通过与正向调节分子结合而被激活，这个正向调节分子叫细胞周期蛋白。细胞周期蛋白取名来自于它们的细胞周期性积累和破坏，这些变化是和海洋脊椎动物和两栖动物胚胎卵裂和分化伴随产生的。细胞周期蛋白的序列是非常多样性的，只有大约100个氨基酸区域处是同源的，这个区域现在定义为细胞周期蛋白盒(Pines,J.&Hunter,T.(1989).Isolation of a human cyclin cDNA:Evidence forcyclin mRNA and protein regulation in the cell cycle and for interaction withp34^cdc2Cell 58,833-846)。在高等真核生物中，按照序列的相似形和在细胞周期中出现的时间，到目前为止细胞周期蛋白分为8个家族(A-H)(Hunter,T.&Pines,J.(1994).Cyclins and cancer 11:Cyclin D and CDK inhibitorscome of ate.Cell 79,573-582)。

细胞周期蛋白A-3稳定的分子内结构表明细胞周期蛋白盒起始于酪氨酸199，终止于异亮氨酸306。细胞周期蛋白盒由一个紧凑的包含5个α转角的结构域组成。在这个结构域中，第一个转角，即转角1，是细胞周期蛋白家族中最为保守的的结构。它开始于天冬酰胺208，该氨基酸残基是非常保守的，与蛋白质表面残基有关，同时接触于C末端结构域和细胞周期蛋白质核心结构域氨基酸残基。接下来的二个转角，即转角2和转角3，大部分埋在内部，从而形成细胞周期蛋白的核心折叠。转角2里的氨基酸残基亦与内表面的内部结构域有关。转角3的氨基酸残基主要是疏水性的，并且与其它氨基酸是广泛接触的，通过转角区域1,2,4和5的保守的疏水性填充反应。这些转角区域跨过分子是为了让表面噜噗将N末端的转角与转角1，转角2和转角3连接，并一起包装于分子的一侧，而那些连接于转角1和2，转角3和4之间的接缝转角则排列于分子的另一侧。

在细胞周期蛋白折叠区域里，有22个氨基酸残基是一致的。这些氨基酸残基存在于N末端的细胞周期盒折叠内。有的起结构支撑作用，有的暴露在外形成两个显著的表面簇。一个表面簇是CDK2与细胞周期蛋白A的结合位点的一部分(Jeffrey,P.D.,et al.,&Pavletich,N.(1995).Mechanism of CDK activationrevealed by the structure of a cyclinA-CDK2 complex.Nature 376,313-320),另一个表面簇也是一个细胞周期蛋白的反应位点。精氨酸211和天门冬氨酸240形成一个显著的存在于疏水环境含有保守离子对的结构，该疏水环境是由周围的氨基酸残基酪氨酸199，丙氨酸212，亮氨酸214，缬氨酸215，缬氨酸236，异亮氨酸239，亮氨酸243，亮氨酸341，丙氨酸344和亮氨酸348。这些氨基酸残基在很多细胞周期蛋白里都是保守的疏水氨基酸，这表明该区域对于维持结构的稳定性起着至关重要的作用。精氨酸211的胍基团可以通过氢键与位于C末端转角2’的主链丝氨酸340和亮氨酸341的羧基基团发生结构域内部接触，这表明该残基可能对结构域之间的稳定起一定作用。

细胞周期蛋白盒折叠区域还广泛存在于各种调节分子，大多数是一些重要的转录因子，例如TFⅡB和肿瘤抑制基因产物pRB的B口袋结构和相关蛋白，p107。

本发明人的多肽含有细胞周期蛋白的所有特征结构，属于细胞周期蛋白家族成员，故推测其同样具有但不限于上述生物学功能。