[发明专利]一种新的多肽——亮氨酸多次重复序列24和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--亮氨酸多次重复序列24，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

亮氨酸多次重复序列是在一些功能及所处细胞位置都不相同的蛋白质中的一个序列短小的模板。这些重复序列通常参与蛋白与蛋白之间的反应。每个亮氨酸重复序列由一个β-α单元构成。这些单元排列形成平行的β片层，并有一面显露于溶剂中，形成延伸的非球形结构，由于这种独特的结构故通常具有较强的蛋白与蛋白之间的反应。亮氨酸多次重复序列的两侧通常是富含半胱氨酸或天冬酰胺的区域，附近还含有较为保守的脂肪族及芳香族氨基酸，有时是甘氨与脯酸氨酸。该重复序列羧基端部分的疏水性共有残基通常含有3,4或7个残基。

该序列是蛋白与细胞调节因子的结合域，蛋白通过它与细胞调节因子结合而抑制调节因子的活性，具有该序列的蛋白通常具有信号传导作用，有时与引起病理反应的蛋白相互作用。例如RNA酶抑制因子中便含有这一序列，该因子是一种胞质蛋白，它紧密结合并抑制胰腺RNA酶超家族，由平行的β片层及βα环形成RNA酶结合域与RNA酶表面结合，在哺乳动物细胞中参与RNA更新的调节并在血管发生中起作用。

倘若人体中蛋白的亮氨酸多次重复序列发生突变，会引起各种程度的Bernard-Soulier疾病，这是一种出血障碍。此外还发现，在人类Ⅰ型免疫缺损病毒Rev蛋白中的单一富含亮氨酸模板是该病毒的反式激活域。

本发明的多肽中含有亮氨酸多次重复序列的模板，该多肽及其拮抗剂，激动剂与抑制剂可用于诊断及防治各种程度的Bernard-Soulier疾病与RNA更新血管发生相关的疾病，以及人类Ⅰ型免疫缺损病毒引起的疾病。

由于如上所述亮氨酸多次重复序列24蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的亮氨酸多次重复序列24蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新亮氨酸多次重复序列24蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--亮氨酸多次重复序列24以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码亮氨酸多次重复序列24的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码亮氨酸多次重复序列24的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产亮氨酸多次重复序列24的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--亮氨酸多次重复序列24的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--亮氨酸多次重复序列24的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与亮氨酸多次重复序列24异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中184-840位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2661位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制亮氨酸多次重复序列24蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与亮氨酸多次重复序列24蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。