[发明专利]一种具有免疫活性的多糖及其制备方法

说明书

本发明涉及免疫制剂，具体涉及一种具有免疫活性的多糖(简称李特多糖)及其制备方法。

多糖具有较强的生物活性及功能，并具有非特异性免疫调节作用，因此为肿瘤、艾滋病及其他疾病治疗开辟了新方向。

经过研究开发，目前已有多种多糖问世。但是，现有的多糖活性不高，服用剂量大，从甜菜中提取的多糖尚不尽如人意。本发明的目的在于克服上述缺点，研制一种从甜菜中提取的李特多糖。

本发明提供了一种李特多糖，其特征在于该李特多糖是由从甜菜中提取的多糖与药用辅料组成的，其中多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。

本发明的李特多糖理化数据如下：1、分子量＞670k。2、含碳量38～40％，含氮量5～16％。3、中性糖含量40～70％，糖醛酸含量45～70％。4、旋光度+50～+705、组成其结构的单糖有阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖6、红外吸收光谱数据：

3430～3433cm^-1、2935～2940cm^-1、2150～2160cm^-1、

1742～1748cm^-1、1620cm^-1、1440cm^-1、1245～1248cm^-1、

1146cm^-1、1022cm^-1、633cm^-1。7、紫外吸收光谱数据：323～327nm

本发明的李特多糖对免疫功能的实验研究如下(上海医药工业研究院药理室试验)：1、受试药物1.1名称：李特多糖1.2送样单位：上海交大昂立股份有限公司1.3批号：986041.4溶剂：生理盐水1.5配制方法：精确称取所需样品量，以生量盐水稀释至所需浓度即可。2、动物2.1来源、种属、品系

昆明种小鼠，由上海医药工业研究院动物组提供，动物合格证号：“沪动(字)第107号”。C57BL/6及ICR小鼠由上海中科院实验动物中心提供，动物合格证号：“中科动管会第005号”。实验动物环境：清洁级。2.2体重：20±2克2.3性别：根据实验所需，每批实验使用同一性别动物。2.4动物数：试验组及阳性对照组每组10只，阴性对照组每组20只。3、其他材料3.1培养基：RPMI 1640，Difco产品，内含10～15％灭活小牛血清(NBS)。3.2培养细胞：Yac-1、L929本实验室传代维持。3.3刀豆球蛋白A(ConA)：Sigma产品。3.4阳性对照品：云芝精华，香港百草堂产品。4、剂量设置：李特多糖50、10及2mg/kg。阳性对照云芝精华2g/kg。5、给药方案：灌胃，每天一次，连续十四天。6、试验主要步骤6.1李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验：取C57BL/6小鼠随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日在无菌条件下取小鼠脾脏，用100目筛制成单个脾细胞悬液，用含10％灭活小牛血清的RPMI1640培养液调节细胞浓度为1×10⁷个细胞/ml，加入96孔细胞培养板，每孔100μl(1×10⁶个细胞/孔)，再加入含ConA(5ug/ml)的培养液100μl，置37℃5％CO₂条件培养72小时。轻轻吸弃上清液100μl，加入MTT溶液(MTT溶液为5mg/ml)20μl。放置37℃5％CO₂条件培养2小时后加入消化液100μl，再放置至次日测各孔OD值并以公式计算刺激指数。刺激指数＝实验组OD值/对照组OD值

实验结果表明，李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案能促进正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖作用，各剂量组的刺激指数与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01)。详见表1、2。

表1 李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验  组别          剂量    给药方案           OD值       刺激指数