[发明专利]新的人Kruppel同源蛋白及其编码序列

说明书

本发明属于生物技术领域和遗传工程领域，具体地说，本发明涉及了一种新的多肽--人Kruppel同源蛋白(Novel Human Kruppel homolog Protein，简称“BioHKHP”)，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

阻遏基因转录的类Kruppel因子是个与DNA的CACCC结合的锌指蛋白，其DNA或蛋白能在哺乳类组织中抑制瘤形成或组织增生。红细胞的类Kruppel因子亚家族包括锌指蛋白，例如红细胞的类Kruppel因子和肺的类Kruppel因子，还包括胎盘的类Kruppel因子。这一亚家族蛋白特征性地具有一个含三个Cys2His2锌指的高度保守的C末端区域，还具有一个富含脯氨酸的N末端结构域。在鼠类β珠蛋白的表达中红细胞的类Kruppel因子是必须的，其锌指结构能结合β珠蛋白启动子的调节要素CACCC。

红细胞的类Kruppel因子是红细胞特异性转录因子，其活性在胎儿β珠蛋白经发育表达为成人β珠蛋白的转变中起关键作用。红细胞类Kruppel因子通过它的三个锌指结构，以高亲和力结合到哺乳类珠蛋白近端启动子的CACCC序列，以此位点激活转录。红细胞类Kruppel因子的高表达有赖于保守的近端启动子和远端启动子的相互作用。而CACCC序列中的位点突变会导致与红细胞类Kruppel因子的结合亲和力下降，引发人类地中海贫血症的发生。[Chen X,et al.,J Biol Chem 1998；273:25031-40]。肺的类Kruppel因子是胚胎发育中关键的锌指转录因子之一，它在肺中高度表达，而在其他组织中则分布有限，在肺的正常发育中起重要作用[Wani MA,et al.,J Biol Chem 1999；274:21180-5]。    

研究发现，特定基因的表达失控大会导致人体大多数疾病的发生，人Kruppel同源蛋白及其编码的多核苷酸与免疫紊乱、肿瘤等疾病有关。因此，为治疗目的研究和开发人Kruppel同源蛋白有重要意义。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人Kruppel同源蛋白(简称为“BioHKHP”)以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该BioHKHP多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码BioHKHP的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码BioHKHP的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产BioHKHP的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的BioHKHP多肽的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明BioHKHP多肽的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断和治疗与BioHKHP异常相关的疾病的方法。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的人Kruppel同源蛋白(BioHKHP)，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽或其氨基酸变异不超过5％的衍生物。

在本发明的第二方面，提供分离的编码这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性：(a)编码上述BioHKHP的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中344-1087位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2691位的序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

下列附图用于说明本发明的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本

发明范围。

图1是本发明的人Kruppel同源蛋白(BioHKHP)和果蝇的Kruppel同源蛋白(AF148686)的氨基酸序列同源性比较图。相同氨基酸在两个序列间用单字符氨基酸表示，相似氨基酸用“+”表示。图2为分离的人Kruppel同源蛋白(BioHKHP)的聚丙烯酰胺凝胶电泳图(SDS-PAGE)。27kDa为蛋白质的分子量，箭头所指为分离出的蛋白条带。