[发明专利]一种新的人神经细胞嗅觉相关蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、病理学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类树突状细胞中表达的hNOEL-iso蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

NOEL蛋白全称neuronal olfactomedin-related er localized protein，意即定位于内质网的神经细胞嗅觉相关蛋白。NOEL属于嗅觉相关蛋白olfactomedin蛋白家族，同时与开角青光眼(Open-angle glaucoma(POAG))的发病密切相关。(Am J MedGenet 1998 Apr 13；76(5)：438-45)开角青光眼是视力损伤的一个非常普遍的原因，病人的GLClA基因第三外显子编码的olfactomedin-同源区发生了突变(Am J MedGenet 1998 Apr 13；76(5)：438-45)。嗅觉神经上皮的胞外粘液基质是一个高度组织化的结构，与存在嗅觉传导机制的化学传感纤毛密切相关。Olfactomedin是这种胞外基质的主要成分，它仅在嗅觉神经上皮表达，这种嗅觉组织特异的糖蛋白含Cys，形成二硫键连接多聚体，构成嗅觉器官胞外基质的初级结构(Yokoe H，et al，ProcNatl Acad Sci U S A 1993)。Olfactomedin最初在两栖类的嗅觉神经上皮的睫状粘膜表面发现，随后发现其遍布各种哺乳动物的中枢神经系统。在鱼类、蛙类、大鼠、小鼠和人中都发现有Olfactomedin的同源基因(Karavanich C，et al，Ann N Y AcadSci 1998；855：294-300)。

在这里，我们发明的是人体中关于人hNOEL基因的同源基因人hNOEL-iso，它来源于在免疫系统中有重要功能的树突状细胞，经用PSORT和signalP软件分析可能有分泌信号肽，编码一个与NOEL同源的蛋白。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过人类hNOEL-iso蛋白序列以及编码这个蛋白的核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hNOEL-iso(Genbank AccessionNo.AF201945)，该基因是一个人hNOEL-iso蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hNOEL-iso。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hNOEL-iso蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hNOEL-iso蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hNOEL-iso蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第31-1251位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第31-1251位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第31-1251位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hNOEL-iso蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hNOEL-iso蛋白质活性的多肽的方法，该方法步骤如下：

(1)将编码具有人hNOEL-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hNOEL-iso蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第31-1251位的核苷酸序列有至少70％的同源性；    

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hNOEL-iso蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hNOEL-iso蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hNOEL-iso蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第31-1251位的序列。