[发明专利]一种新的人钾离子通道调节因子蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、生理学以及基因工程领域。具体地，本发明涉及一种在人类肾上腺中表达的hPCMF蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

钾离子通道(potassium channel)调节细胞膜的极化状况，一般由ATP、cGMP等激发其开通或者关闭状态。(Cardiovasc Drugs Ther 1995 Mar；9 Suppl 2：229-36)。局部缺血性心脏病(ischemic heart disease)是一种很常见的心脏疾病，目前多数通过调节钾离子通道的药物来治疗。钾离子通道改变细胞膜极性，从而使血管平滑肌放松，以改善心脏供血情况。(J Clin Pharmacol 1996 Jul；36(7)：559-72)。钾离子通道调节因子(potassium channel modulatory factor，PCMF)通过机体自身反馈机制自然调控钾离子通道的开通或闭合状态，生理意义非常重要。(Life Sci 1995；56(11-12)：957-64)

本发明中，我们在人类肾上腺中克隆到加州雨虎(Aplysia californica)PCMF基因的同源基因。在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hPCMF蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hPCMF(Genbank AccessionNo.AF155652)，该基因是一个人hPCMF蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hPCMF。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hPCMF蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hPCMF蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hPCMF蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第16-1161位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第16-1161位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第16-1161位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hPCMF蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hPCMF蛋白质活性的多肽的方法，该方法步骤如下：

(1)将编码具有人hPCMF蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hPCMF蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第16-1161位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hPCMF蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hPCMF蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hPCMF蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第16-1161位的序列。

本发明还提供了与hPCMF蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。