[发明专利]一种新的多肽——人液泡质子－腺苷三磷酸酶C亚基12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

已知，人氢离子-腺苷三磷酸酶能将离子/质子“泵入”细胞内的细胞器中或使离子/质子跨越某些细胞(如：破骨细胞、肾间质细胞)的质膜。人氢离子-腺苷三磷酸酶的催化部位是由3个A亚基和3个B亚基构成的六聚体，具有结合和水解ATP的作用；而另有3个亚基C、D、和E具有调节作用。人氢离子-腺苷三磷酸酶的主要功能是在细胞内调节局部区域的酸碱度，在受体介导的胞饮作用、胞内膜流、蛋白降解及偶联转运中起重要作用。故人氢离子-腺苷三磷酸酶具有肾脏酸化作用、骨重吸收作用和稳定细胞内pH值等作用。可见，人V-ATPaseC亚基作为3个调节亚基之一，具有调节人氢离子-腺苷三磷酸酶活性在作用。

重组的人V-ATPase C亚基蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗V-ATPase C亚基功能低下或丧失所致的疾病和用于筛选促进或对抗V-ATPase C亚基功能的抗体，多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制V-ATPase C亚基的功能。用表达的重组V-ATPase C亚基蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激V-ATPase C亚基功能的多肽分子。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基42的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12。

由于如上所述人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人液泡质子-腺苷三磷酸酶C亚基12异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中935-1255位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1980位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。