[发明专利]一种新的多肽——人小核蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人小核蛋白9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在真核细胞的核膜上有一种小的核RNA-U2 snRNA，在核中，它并不仅仅作为RNA分子起作用，而且还能够组合形成核蛋白粒子(U2 snRNP)。在人类细胞中，至少有九种多肽与U2 snRNP相关(Bringmann,P.And Luhrmann,R.(1986)),A’蛋白就是其中的一种，其分子量约为28,444da。A’上一段1054bp的cDNA包含了一个756bp的开放阅读框，编码含有255个氨基酸残基的一段多肽。这段开放阅读框序列还附加了一段49bp的5’非翻译区域，并且其尾部有226bp的3’非翻译区域，其中还包含了一种多聚腺苷酸转换信号。从结构上研究，A’蛋白的主要特点是：(1)N-末端有一个Leu富含区域。(2)在许多RNA结合蛋白中都有与RNP1和RNP2相同源的蛋白序列，专一性结合RNA，但在A’蛋白中没有发现这种序列，而另外的一种U2 snRNP特异性蛋白B”中却有这种同源序列存在。(3)A’蛋白的C-末端表达极强烈的亲水特性，可以形成一种RNA结合部分。

在人类细胞中，A’和B”两种特异性蛋白在U2 sn RNP中都起到了前体mRNA拼接的作用，形成必要的因子，使U2 sn RNP和前体mRNA或拼接机制的其他组分之间在拼接过程中特异性相互作用。许多蛋白与mRNA的作用只限于结构上的，而U2 sn RNP和前体mRNA之间的相互作用却是高度特异性的。

在开放阅读框中，起始密码子ATG位于第57位上，产生一个含有255个氨基酸残基的翻译单位，序列中-3位点的A碱基和+4位点的G碱基有利于对翻译起始进行正确定位(Kozak,M.(1986))，翻译过程以终止密码子TGA结束。

本发明的多肽与上述的A’蛋白的开放阅读框有97％的相同性，100％的相似性，并且还包含U2 sn RNP蛋白家族特征性的保守序列，因此认为此蛋白是一种新的小核蛋白，具有与U2 sn RNP蛋白家族中的A’蛋白相似的生物学功能，并命名为人小核蛋白9。

由于如上所述人小核蛋白9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人小核蛋白9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人小核蛋白9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人小核蛋白9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人小核蛋白9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人小核蛋白9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人小核蛋白9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人小核蛋白9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人小核蛋白9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人小核蛋白9异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少98％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中961-1209位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1415位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。