[发明专利]一种新的多肽——人圆筒素30和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人圆筒素30，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

哺乳动物的精子发生是经历了一系列复杂过程才导致精子细胞的典型形态与正常功能，其中有些特殊蛋白的出现非常重要地参与了这一过程。

环绕在哺乳动物精子细胞核的基底外侧部的精子头部的细胞骨架萼部包含两类基础蛋白，其中一类称为圆筒素(cylicin)，已发现的圆筒素有圆筒素Ⅰ(cylicinⅠ)、圆筒素Ⅱ(cylicinⅡ)。圆筒素先前被称为多倍束状多肽(multiple-band polypeptides,MBPs)，现已被确认为是一种新型的细胞骨架蛋白，它在牛与人的精子细胞头部均有发现。

圆筒素Ⅱ含有一段高密度的多变的氨基酸序列，一段富含lys-lys-asp三联碱基对重复序列，一段九个中心重复单位所形成的α-螺旋。一段富含lys-lys-asp三联碱基对重复序列可表示为Lys-Lys-X(KKX),X最可能是天冬氨酸或甘氨酸，它特征性地出现在圆筒素Ⅱ的C端。圆筒素Ⅱ的中心部分含有九个重复单位，每一单位含多个KK^D/_G三肽。(Hess H,et,al.；1995)

圆筒素Ⅱ基因在人体睾丸组织中高度特异表达，研究提示可能有一大的圆筒素家族参与精子细胞头部的骨架形成与精子细胞头部的多样性。并且提示圆筒素Ⅱ基因的表达异常与男性不孕症、精原细胞疾病密切相关。(Hess H,et,al.；1995)。

本发明的多肽与牛圆筒素Ⅱ是同源蛋白(同源性31％，相似性57％)，具有圆筒素蛋白家族的特征性序列，属于圆筒素蛋白家族，故本发明的多肽命名为人圆筒素30。本发明的多肽具有圆筒素蛋白家族相似的生物学功能，其表达异常可引起一些相关疾病的发生如男性不孕症、精原细胞疾病。

由于如上所述人圆筒素30蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人圆筒素30蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人圆筒素30蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人圆筒素30以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人圆筒素30的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人圆筒素30的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人圆筒素30的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人圆筒素30的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人圆筒素30的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人圆筒素30异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中4-81 9位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2554位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人圆筒素30蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。