[发明专利]一种新的多肽——DNA聚合酶10和编码这种多肽的多核苷酸无效
申请号: | 00111964.8 | 申请日: | 2000-03-10 |
公开(公告)号: | CN1313394A | 公开(公告)日: | 2001-09-19 |
发明(设计)人: | 毛裕民;谢毅 | 申请(专利权)人: | 上海博德基因开发有限公司 |
主分类号: | C12N15/55 | 分类号: | C12N15/55;C12N9/22;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/46 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 多肽 dna 聚合 10 编码 这种 多核苷酸 | ||
本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明描述了一种新的多肽--DNA聚合酶10,以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
DNA的精确的半保留复制在物种的繁衍后代上起着关键的作用。有许多酶参与这个过程,如DNA聚合酶,解旋酶、拓扑异构酶等等。其中关键的是DNA聚合酶。DNA聚合酶可以将四种前体核苷酸按照碱基配对规律合成DNA链。它们都需要一条DNA单链作为模板,以及RNA或蛋白作为引物。DNA聚合酶只能以四种核苷酸5’-三磷酸为前体,反应通式为:Poly(核苷酸)n-3’-OH+DNTP-->Poly(核苷酸)n+1-3’-OH+2Pi,这种活性除了能使DNA链延伸之外,还有修复DNA和替换RNA引物的作用。
DNA聚合酶还有3’-5’外切酶的活性。这种酶活性是基于对不配对的碱基造成的单链的识别。因此这种酶活性是保证其聚合作用的正确性所不可缺少的,这种功能称为校对功能。这对于DNA作为遗传物质所必需的稳定性和极高的保真度是至关重要的。
除此以外,DNA聚合酶还有5’-3’的外切酶活性。这种活性可以使DNA双链上的缺口发生平移。
现在已经发现了很多种DNA聚合酶。各种DNA聚合酶的功能不尽相同。通过对不同的DNA聚合酶的蛋白序列比较,发现有6个区域的同源性较高。其中第一个区域最为保守,包括一个四肽的结构,其中有两个天冬氨酸残基。这一区域的功能可能与镁离子的结合有关。这一段保守序列是:[YA]-[GLIVMSTAC]-D-T-D-[SG]-[LIVMFTC]-x-[LIVMSTAC]
通过基因芯片的分析发现,在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中,本发明的多肽的表达谱与DNA聚合酶17的表达谱非常近似,因此二者功能也可能类似。本发明被命名为DNA聚合酶10。
由于如上所述DNA聚合酶10蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用,而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白,因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的DNA聚合酶10蛋白,特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新DNA聚合酶10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础,因此分离其编码DNA是非常重要的。
本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--DNA聚合酶10以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。
本发明的另一个目的是提供含有编码DNA聚合酶10的多核苷酸的重组载体。
本发明的另一个目的是提供含有编码DNA聚合酶10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。
本发明的另一个目的是提供生产DNA聚合酶10的方法。
本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--DNA聚合酶10的抗体。
本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--DNA聚合酶10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。
本发明的另一个目的是提供诊断治疗与DNA聚合酶10异常相关的疾病的方法。
本发明涉及一种分离的多肽,该多肽是人源的,它包含:具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地,该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。
本发明还涉及一种分离的多核苷酸,它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体:
(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸;
(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸;
(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70%相同性的多核苷酸。
更佳地,该多核苷酸的序列是选自下组的一种:(a)具有SEQ ID NO:1中682-945位的序列;和(b)具有SEQ ID NO:1中1-651位的序列。
本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体,特别是表达载体;一种用该载体遗传工程化的宿主细胞,包括转化、转导或转染的宿主细胞;一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。
本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。
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