[发明专利]一种新的多肽——人转谷氨酰胺酶12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人转谷氨酰胺酶12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

转谷氨酰胺酶是一种钙依赖的酶，在生物体内通过促进一条多肽链上的谷氨酰胺γ-碳基与第二条多肽链上的赖氨酸ε-氨基间异肽键的形成来催化蛋白间的铰链结合。同时，转谷氨酰胺酶在生物体内还催化蛋白多聚氨基的结合，以提高各组织在生物体内的稳定性及抗腐蚀能力。

人们最为了解的转谷氨酰胺酶是血凝结因子ⅩⅢ，该因子为一胞质四聚体蛋白，由两个催化A亚单位和两个非催化B亚单位组成。血凝结因子ⅩⅢ在生物体内促进纤维链的交互连接，以形成稳定的血纤维蛋白血块，促进受伤组织的愈合。

其它类型的转谷氨酰胺酶广泛的分布于多种不同的器官、组织与体液中。其在各种组织中均起着十分重要的作用。在转谷氨酰胺酶中，其中一保守的半胱氨酸残基参与该酶在生物体内的催化机制。

红细胞膜在生物体内通常与4.2蛋白结合作用，4.2蛋白在生物体内主要负责调节红细胞膜的形状及其作用机制，其在进化上亦与转谷氨酰胺酶密切相关。然而，其蛋白序列的半胱氨酸活性位点残基被丙氨酸残基所替代，而4.2蛋白则不显示转谷氨酰胺酶活性。

在不同来源的转谷氨酰胺酶蛋白序列中均含有如下所示的保守的一致性序列片段：[GT]-Q-[CA]-W-V-X-[SA]-[GA]-[IVT]-X(2)-T-X-[LMSC]-R-[CSA]-[LV]-G；

其中，第一个半胱氨酸残基为活性位点氨基酸残基。该位点的突变将导致酶活性的丧失，从而影响酶在生物体生物活性的发挥。

转谷氨酰胺酶在生物体内参与蛋白的翻译后修饰过程，其催化将有用的谷氨酰胺残基上的酰基转移到目的蛋白上，以增强各组织的稳定性及抗腐蚀能力。生物体内不同的组织均存在着大量的转谷氨酰胺酶，如质膜转谷氨酰胺酶，凝血因子ⅩⅢ，血管中的转谷氨酰酶等。红细胞膜的形状及其作用机制在进化上与转谷氨酰胺酶密切相关。这些转谷氨酰胺酶均在生物体生理及病理过程中起着重要的作用，其调节着细胞内及细胞外各种小分子的稳定[Greenberg C.S.,Birckbichler P.J.et al.,FASEB J,1991(5):3071-7]。该酶在生物体内的表达异常将导致以上各相关组织的功能异常，从而引发各种相关组织的疾病，如：血液系统疾病、各种皮肤病及一些相关组织的肿瘤和癌症等。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人转谷氨酰胺酶10的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人转谷氨酰胺酶12。

由于如上所述人转谷氨酰胺酶12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人转谷氨酰胺酶12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人转谷氨酰胺酶12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人转谷氨酰胺酶12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人转谷氨酰胺酶12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人转谷氨酰胺酶12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人转谷氨酰胺酶12的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人转谷氨酰胺酶12的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人转谷氨酰胺酶12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人转谷氨酰胺酶12异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：