[发明专利]一种新的多肽——人CDC4类似蛋白12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人CDC4类似蛋白12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞周期的运转是十分有序的，沿着G1——S——G2——M的顺序进行，这是与细胞周期进行有关的基因有序表达的结果。与细胞分裂有关的基因称为cdc(cell division cycle gene)这些基因的有序表达是受周期中一些检验点或称为调控点调节的。该点的作用是作用于细胞周期转换时序的调控通路，保证细胞周期中的关键事件高度准确的完成。它受制于一系列特异或非特异环境信号的影响，从分子水平看是基于一些基因及其产物对外界信号的反应。细胞周期检验点普遍表现在高等真核生物和酵母细胞中，例如酵母细胞DNA合成前的启动点，高等真核生物G1期中的R点，DNA损伤检验点，DNA复制检验点，G2/M检验点等等。上述的各个检验点保证了产生具有正常遗传性能和生理功能的子代细胞，如果这些调控途径异常，周期不能正常运转和丧失周期关键事件的忠实性，从而导致遗传性能紊乱、增殖分化异常和细胞癌变，甚至导致细胞死亡。

嗜糖酿酒裂殖酵母有一个细胞分裂调控基因家族，已发现的有四种：：cdc3,cdc4,cdc8,and cdc12(Nurse,P.,P.Thuriaux,and K.Nasmyth.1976.Mol.& Gen.Genet.146:167-178)。其中细胞分裂周期调控基因(cell division cyclegene,CDC4)已被克隆，它编码一个有141个氨基酸的多肽，这个蛋白与EF-手性蛋白(例如肌球蛋白轻链、钙调蛋白和肌钙蛋白)有相似性，cdc4的缺失会导致细胞质分裂无法完成，从而导致显性的多核细胞的死亡。CDC4蛋白可以形成一个200KD大小的复合物，此复合物可结合于UTP起一定的作用。(J Cell Biol1995 Aug；130(3):651-60)

细胞分裂周期调控基因(cell division cycle gene)编码的蛋白是一种细胞分裂周期调控因子——CDC4，但对其结构研究的还不是很清楚，具体请查阅相关文献。(J Mol Biol 1987 May 20；195(2):233-45)

从鼠的12天胚胎心脏组织的cDNA文库中克隆到的蛋白经研究证明，细胞分裂周期调控蛋白CDC4与G蛋白betal亚基有一种相似的重复结构，根据它二级结构的高度保守性推测，这一重复结构有特定的功能。(DNA Seq1992；3(4):213-20)

周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制因子S1C1的降解是细胞周期倚赖性的，S1C1在早G1期是稳定的防止S期CDK早熟活化，在G1期CDK与G1期周期蛋白(cyclin)结合产生一个活化的G1期CDK-cyclin复合物后，磷酸化S1C1，促使后者通过CDC34通路被水解，然后活化的S期CDK，通过磷酸化一些关键底物起始DNA复制。在此通路中，其他几种蛋白如CDC4、CDC53、SKP1等对于S1C1的降解均是十分重要的。(EMBO J.1997 Oct 1；16(19):5966-76.)

裂殖酵母的CDC4基因产物在细胞周期的G1晚期向S期过渡中不可缺少的，免疫荧光检验法证明了CDC4基因产物在细胞核中的定位，已有的研究发现，CDC4基因产物是细胞核骨架的重要组分蛋白，但CDC4基因产物的具体功能还有待进一步研究。(Biochem Biophys Res Commun 1990 Nov 15；172(3):1324-30)

有丝分裂细胞周期的突变的cdc4基因，会阻遏核DNA复制的起始、复制后纺锤体的分离。在减数分裂中，cdc4基因也有极其重要的作用。(Genetics 1977May；86(1):57-72)

SEL-10也属于CDC4蛋白家族，在对线虫的研究中发现，SEL-10是lin-12/Notch调控信号的负调控因子，SEL-10可以提高泛素刺激的lin-12/Notch调控信号，从而SEL-10可以调控lin-12/Notch的活性，并可以间接的调控肿瘤的发生。(Genes Dev 1997 Dec 1；11(23):3182-93)

SEL-10与SEL-12结合在一起形成复合物调控presenilin基因水平的调节。Presenilin基因包括PS1和PS2，它们的突变会导致人的Alzheimer氏综合症。(Proc Natl Acad Sci U S A 1998 Dec 22；95(26):15787-91)