[发明专利]全血法检测C－反应性蛋白技术

说明书

本发明属于医学领域，具体涉及一种全血法检测C-反应性蛋白(简称CRP)的技术及其试剂配方。

CRP的检测是临床常用的检测项目，60年代初期被列入临床上诊断风湿热活动期检测指证，当时称为“丙种球蛋白试验”其方法是以肺炎双菌的丙种多糖体与病人血清在毛细管中进行，观察两液接触面有无白色沉淀环束判断结果，该法没有考虑排除非特异物质干扰，因此该法假阳性不可避免。70年代中期，由福州部队总医院朱忠勇主编，上海科技出版社出版的《临床医学检验》一书中介绍C-反应性蛋白试验，其方法是将病人血清与C-多糖体放入玻璃试管中，置于37℃水浴中分别10、30、60min观察玻璃试管两液接触面有无白色沉淀束判断结果，此法操作繁琐，仍未解决非特异性物质造成的假阳性。80年代初期，由武汉医学院第二附属医院孔祥云等主编，湖北科技出版的《实用临床医学检验》一书中介绍的方法考虑到试验可能出现的假阳性，给阳性标本作确证试验，即将阳性血清中加入50％枸椽酸钠以除去钙离子，再作C-反应性蛋白试验，如为阴性则证明阳性为C-反应性蛋白存在，报告阳性，因C-反应性蛋白与C-多糖体产生沉淀反应需有Ca存在，如除去Ca后仍为阳性这是假阳性，此法虽考虑到有假阳性，但仍未找到真正原因和解决方法。80年代后期，上海市医学化验所，创立了血清胶乳法，以聚苯乙烯为载体制成抗原胶乳，在黑色反应玻璃板上加事先经56℃、30min灭活血清与抗原胶乳起凝集反应，有明显凝集颗粒者为阳性，无为阴性，该法创立用56℃、30min灭活解决了血清中可能存在的部分自身免疫疾病的非特异性干扰物质，大大提高了试验的可靠性，但是该法需静脉采血，用血量大，给患者带来痛苦，56℃30min灭活费时、操作繁琐。

本发明的目的在于：全血法检测C-反应性蛋白，用低浓度的强碱溶液作为标本稀释液，代替56℃30min灭活从而破坏干扰物质，简化操作过程，实现快速检测。

本发明的目的是这样实现的：在试管中加入标本稀液，然后加入患者手指微量全血，混匀，低速离心1min取上清液于黑色反应玻板上，滴加胶乳试剂，混匀，随即摇动反应板2min内观察结果。

标本稀释液取4.2gNaHCO3,10％NaoH 0.4ml，加蒸馏水至100ml配制。

实施例：

1、材料：

1.1C-反应性蛋白胶乳试剂，购自上海市医化所

1.2标本稀释液，称取NaHCO3 4.2克，10％NaOH 400ml，加蒸溜水至100ml。

1.3门诊和住院病人随机采样。

1.4黑色凝集反应玻板。

2、方法：

2.1在小试管中加入标本稀释液60ul。

2.2加入患者手指微量全血40ul，混匀使血浆成1∶3稀释。

2.3低速离心1min取上层清液50ul于黑色反应玻板上。

2.4加胶乳试剂一滴，混匀，随即摇动反应板，2min内观察结果。

3、结果：

在2min内有明显凝集颗粒者为阳性，无明显凝集颗粒者为阴性。阳性结果表示血浆中C-反应性蛋白含量＞10mg/l。阳性标本再经信比稀释后检测C-反应性蛋白。

若1∶6阳性，C-反应性蛋白＞20mg/l

  1∶12阳性，C-反应性蛋白＞40mg/l

  1∶24阳性，C-反应性蛋白80mg/l

4、结论：

4.1全血法与血清法平行检测，83例患者的标本分别用全血法和血清法进行平行检测C-反应性蛋白，原法阳性18例(18/83)，阴性65例(65/83)，同时用全血法检测，阳性亦为18例(18/83)，阴性为65例(65/83)，其两法检测结果的相关性为100％。

4.2以NaHCO3为主体，加入微量的NaOH配成低浓度强碱溶液作为标本稀释液，该稀释液既达到缓冲作用，又能破坏干扰物，达到灭活，而且能保持红细胞完好没有溶血现象，有利于判断结果，该稀释液集稀释、灭活、缓冲三位一体。

本发明具有以下优点：1、用标本稀释液替代56℃30min灭活，操作步骤简化，成本低廉，速度快，效益高。2、手指微量全血替代静脉采血，病人痛苦减轻。