[发明专利]烷基酰胺－亚胺键合固定相及其制备方法

说明书

本发明是关于一种高效液相色谱烷基酰胺-亚胺键合固定相及其制备方法。

烷基硅胶键合固定相，特别是十八烷基键合固定相，是最广泛应用的反相色谱固定相，只需调节流动相组成，就可实现大多数有机化合物的分离分析。但是，由于硅胶表面残留硅醇基的存在，分离某些极性化合物，特别是碱性有机化合物时色谱峰变形拖尾，灵敏度下降。采取封端技术，也不能完全消除残留硅醇基的影响，色谱峰变形拖尾一直是分离碱性物质的难点。在分离碱性物质时，为了抑制硅醇基的活性，往往不得不在缓冲溶液流动相条件下进行，长期使用缓冲溶液将影响色谱柱的使用寿命。近年来，为了改善碱性化合物的分离，提出并制备了空间保护相和烷基酰胺屏蔽相。Kirkland等(J.Chromatogr.Sci.，1994，32：473)采用具有空间保护基团的硅烷试剂制备了空间保护相，但这种硅烷试剂制备难度大，价格高。Buszewskic等(J.Chromatogr.A，1994，673：11)制备了烷基酰胺键合固定相，改善了色谱峰的对称性。依据静电屏蔽原理，黄天宝等(色谱，1999，17(4)：339)制备了烷基胺键合固定相，也获得对称性较好的色谱峰形。

我们制备了一种新型烷基酰胺-亚胺反相色谱固定相，能有效地抑制硅醇基的活性，改善碱性化合物的色谱峰形，用甲醇-水流动相就可以实现包括碱性化合物在内的有机化合物的分离分析。

本发明的目的是提供一种新的反相色谱固定相及其制备方法，以满足在简单的流动相条件下，分离分析包括碱性化合物在内的大多数有机化合物。该固定相在微粒载体表面键合带氨基的极性基团，然后再与长链烷基酰氯反应而制得，该固定相的键合链上有一个亚氨基和一个烷基酰胺基团，强化了对残留硅醇基活性的静电屏蔽作用。

本发明采用含两个氨基的硅烷偶联剂将烷基酰氯键合在一种含羟基的微粒载体上，得到一种高效液相色谱柱填料，在分离包括碱性化合物在内的有机化合物时，具有良好色谱峰对称性。本发明所述的键合固定相结构为：在结构式中，SG代表微粒载体，最好是硅胶，m和n最好等于2～5，R为长链烷基，最好是C₇H₁₅～C₁₇H₃₅。其合成方法是：微粒载体经过酸洗，干燥，然后与含两个氨基的硅烷偶联剂反应，制得氨基改性微粒，再与烷基酰氯反应制得本发明所述的色谱固定相。

本发明所述的固定相的具体合成步骤如下：

1.微粒载体的预处理：微粒载体中加入一定量的盐酸或硝酸溶液，超声波处理后，回流2～9h，过滤，用二次重蒸馏水洗至中性，于110～200℃干燥，制得表面具有均匀分布羟基的微粒(SG-OH)。

2.氨基改性微粒的合成：在预处理后的微粒载体中加入有机溶剂，适量的硅烷偶联剂，超声处理后，于60～130℃反应4～11h，趁热用玻璃砂漏斗过滤，依次用甲苯、甲醇、乙醚洗涤，然后放在真空干燥器中干燥，得氨基改性微粒。其化学反应如下：式中X最好为甲氧基或乙氧基。

3.烷基酰氯的合成：取一定量的有机酸和过量的氯化亚砜，在一定量的溶剂中和N₂保护下，于50～120℃，反应5～14h，蒸馏除去溶剂和未反应的氯化亚砜得到烷基酰氯。该反应为：  式中，R为C₅H₁₁～C₂₉H₅₉，最好C₇H₁₅～C₁₇H₃₅。

4.烷基酰胺-亚胺键合固定相的制备：取一定量的步骤2制得的氨基改性微粒与步骤3制得的烷基酰氯，于一定量的溶剂中，在N₂保护和50～130℃条件下，反应8～30h，过滤，洗涤，真空干燥后，得本发明所述的固定相。化学反应为：