[发明专利]联合型支原体检测试剂及制备方法

说明书

本发明属于医药领域，特别涉及一种因支原体引起的泌尿生殖道疾病的检测试剂及其制备方法。

支原体是性传播性泌尿生殖道疾病的常见病原体。检出率占性病人群的40～70％，支原体感染可导致尿生殖道炎、前列腺炎、盆腔炎、男性不育、女性不孕、绒毛膜炎和低出生体重儿等疾病。目前，国内外对支原体实验诊断技术的研究较多，如特异性抗体检测技术、代谢抑制试验、Southem Blot、PCR法、培养法等(Taylor-Robinson D.Clin Lab Sci，1989；9(30)：501-523.和Jensen JS et al.J ClinMicrobiol，1991；29(1)：46-50)。抗体检测技术易出现交叉反应。代谢抑制试验，需加特异性抗体抑制支原体的生长，临床应用不多。SouthernBlot实验技术要求较高，不易普遍开展。PCR法容易出现假阳性和假阴性，已被国家卫生部下令禁止应用于临床检验。而培养法是根据支原体的生活习性而采用的特异性选择性培养基检测支原体的方法，目前各医院常用的培养基多为单一支原体培养基，如单一的解脲性支原体培养基、单一的人型支原体培养基。单一的支原体培养基国内已有人申报了专利(申请号：96117201.0发明人：王荷英)。解脲型支原体国内有一家单位申请到了批号(上海金桥公司)。但是联合型支原体培养基未见有人申报专利，国内外迄今也未见有批号问世。

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺点，提出了能在一种试剂中同时检出几种支原体的试剂及制备方法，达到了降低成本、防止漏检、节约患者开支和减少检测工作量等目的，为支原体病的及时有效治疗提供了保证。

联合型支原体检测试剂是一种液体培养基，其制备方法如下：

1、培养基：新鲜牛肉浸出液及猪胃或肺消化液的提取：

(1)、牛肉浸出液的提取：新鲜牛肉1～2斤绞碎后，加500～1000ml蒸馏水浸泡10～25小时，煮沸过滤取其滤液。

(2)、猪胃或肺消化液的提取：取新鲜猪胃或肺1～2斤，绞碎，加500～1000ml蒸馏水、0.3～2克蛋白酶，消化10～25小时，煮沸过滤，取其滤液。

2、基础培养基的配制：

按下列比例将下列物质混合：

牛肉浸出液                300～600ml

猪胃或肺消化液            100～400ml

氯化钠                    3～5克

磷酸二氢钾                1～3克

蛋白胨                    5～20克

待固体化学物质完全溶解后，煮沸后过滤备用。

3、完全培养基的配制：

按下列比例将下列物质混合：

基础培养基                500～900ml

新鲜小牛血清              100～500ml

新鲜酵母液                50～150ml

脲素                      0.5～2克

精氨酸                    3～15克

酚红                      50～150毫克

青霉素                    50～150万单位

完全培养基配制完成后，即为联合型支原体检测试剂。该试剂既有利于解脲型支原体生长，又有利于人型支原体生长。并含有为解脲型支原体分解利用为能源的尿素和为人型支原体分解为能量的精氨酸，尿素和精氨酸被分解后释放出NH₄⁺，使试剂pH值升高，最终使培养基中的酚红指示剂从黄色变成红色。

本发明能高效地同时检出人型支原体和解脲型支原体，与单一支原体检测试剂比较，其特点是：性能稳定，判断标准直观，特异性强，检出率高，不需特殊设备，24小时即可报结果。本试剂已在6家综合性医院试用，观察了5000多例病例，效果很好。为支原体感染病的及时有效治疗提供了保证。