[发明专利]一种用于调节畜禽胃肠道微生态的饲料添加剂

说明书

本发明涉及一种屎肠球菌(Enterococcus faecium)纯培养物的用于调节畜禽胃肠道微生态的饲料添加剂，该纯培养物已于二零零零年一月二十五日由武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏编号为CCTCC NO:M99016。

传统的饲料添加剂主要包括各种非生物性的抗生素类生长促进剂及营养性添加物，在饲料中应用已达半个多世纪，对畜牧业的发展起到了重大促进作用，同时也暴露出其两大弱点一抗药性和药物残留日趋严重。目前，欧美许多国家已经或正在计划禁止或严格限制使用抗生素类添加剂。调节畜禽胃肠道微生态的饲料添加剂(亦称益生素)是对动物有益的微生物活菌制品，它通过在动物肠道中大量繁殖，抑制有害细菌生长，维持动物正常的肠道微生物平衡发挥作用；能显著促进畜禽生长，提高畜禽生产性能，增强动物的免疫机能，有效防治疾病，克服使用抗生素引起的菌群失调、内源感染、耐药性、药物残留和污染等问题，可替代或部分替代抗生素，现已成为新一代畜禽促生长饲料添加剂产品。

屎肠球菌广泛存在与自然界和畜禽胃肠道中，是一种有益的微生物。普通的屎肠球菌因其耐酸、耐高温等抗逆性能较差，因而不能用作饲料添加剂使用。

本发明的目的是提供一种含有活的屎肠球菌(CCTCC NO:M99016)纯培养物的、且具有一定的抵抗动物胃肠道逆性环境、能调节胃肠道微生态平衡的饲料添加剂。

本发明的目的是这样实现的：其特征在于：屎肠球菌(CCTCC NO:M99016)菌泥5％～10％(W/W)，营养性辅料10％～40％(W/W)，稳定剂10％～20(W/W)％，填充料40％～60％(W/W)。本发明所选择的动物源屎肠球菌纯培养物具有较好的耐酸、耐高温特性，对大多数在饲料中使用的抗生素有一定耐受性。该纯培养物经过分离纯化和鉴定(美国VITEC全自动细菌分析仪)，具有以下的特征：经胆汁耐受性筛选检测证实能耐受30％～40％胆汁；经耐酸性筛选检测证实在pH3.0条件下保温2小时，存活率为1.4％(参考文献：动物源乳杆菌筛选及生物特性参数测定《江苏农学院学报》，1997,18(1):1-5；Comparison of the bilesalts and sodium dodecyl sulfate stress responses in Enterococcus faecalis《Appliedand Environmental Microbiology》,1996,62(7):2416-2420)；经安全性筛选检测，即将含有108和109cfu/nl活菌的发酵液分别给1日龄健康雏鸡腹腔注射和口服，在整个试验期内未发现任何毒副作用，证实其无害。本发明所选择的纯培养物经药敏检测证实其对氨苄青霉素、氯霉素、庆大霉素、青霉素G、利福平、氯林可霉素、环丙氟哌酸、托布霉素、红霉素、氧氟沙星、SMZ、洛克沙生、泰乐菌素、奎乙醇、阿散酸、呋喃唑酮、莫能霉素耐药；对杆菌肽、盐霉素中等耐药(美国VITEC全自动细菌分析仪)。耐高温检测(参考文献：《生物技术在饲料工业中的应用》，1995年第一版，北京：中国农业出版社；Survivaloflactic acid bacteria in the human stomach and adhesion to intestinal cells《Journalof Dairy Science》1987,70:1-12；Survival,physiology,and lysis of lactococcus lactisin the digestive tract＜Appl.Envir.Microbiol.＞1 999,65:4881-4886)表明，经85℃热处理3min，该纯培养物存活率在82％以上，证实其对高温有一定的耐受性。本发明所使用的屎肠球菌(CCTCC NO:M99016)菌泥，其制法如下：(1)挑取斜面保存的屎链球菌单菌落4～5个，接种于装有1000mlKF培养基(参考文献：现代细菌学培养基和生化试验手册，1992年第一版，北京：中国科学技术出版社，培养基中不加琼脂、TTC和溴甲酚紫)的三角瓶中，37℃静置培养8小时，作为种子液；取种子液接种于装有25升灭菌的生产用培养基的发酵罐中，37±1℃静置培养14小时；生产用培养基制备：蛋白胨，10g；牛肉浸膏，5g；氯化钠，5g；葡萄糖，1g；碳酸钙，1g；蒸馏水，1000ml；pH调至7.6；(2)发酵结束后，菌液在室温25-30℃，转速4000转/min条件下，离心30min，离心后除去上清夜，取菌泥，调整菌体浓度为5000亿/ml，备用；将菌泥加入到上述添加剂配方中作为饲料添加剂，其在猪，尤其是仔猪的胃肠道中能有效的增加有益微生物的数量，调节微生态平衡，改善其消化吸收机能，抑制有害细菌生长，预防或减轻腹泻、下痢等疾病的危害。应用于其它畜禽类，例如：鸡、鸭、狗、猫等，也有良好效果。由于该屎肠球菌纯培养物具有耐高温和耐受大多数抗生素的特性，其作为饲料添加剂在饲料制造过程中，能够耐受制粒和饲料中抗生素的破坏力，保持一定的活菌数量。由于上述缘故，本添加剂才能作为一种具生物活性的，且具有一定的抵抗猪胃肠道逆行环境、调节胃肠道微生态平衡能力的饲料添加剂。10％～40％(W/W)营养性辅料(W/W的意义是重量百分比，以下同。)的作用是为该屎肠球菌纯培养物在胃肠道快速增殖提供营养，其比例是根据屎肠球菌纯培养物的营养需求而确定；10％～20(W/W)稳定剂的作用是保持屎肠球菌纯培养物的活性，其比例是根据有关实验数据确定的；40％～60％(W/W)填充料的作用是使屎肠球菌纯培养物维持一定的固体形态，且填充料成分本身也是一种重要的营养源，其比例是根据有关实验结果确定的。