[发明专利]花生四烯酸发酵制配方法

说明书

本发明涉及发酵工程领域，更具体涉及一种花生四烯酸发酵制配方法。

自八十年代以来围绕多不饱和脂肪酸(PuFAs)发酵的研究工作取得了长足进展。目前，美国Starge公司、日本出光石油化学公司等已将发酵生产的γ-亚麻酸(GLA)产品投放市场，发酵生产的GLA油脂与月见草油相比，不仅具有GLA含量高、产量稳定、工业化生产不受自然条件限制等优点，而且其油脂成分更接近母乳。除GLA以外，其它PuFAs发酵尚处在实验阶段，是发酵工业及医药、食品工业的研究热点。目前国内还主要停留在GLA微生物发酵工艺研究方面，而国外则将重点转移到花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)的产业化研究上，但到目前为止，国外尚无GLA以外的PuFAs微生物发酵产品投放市场的报道，但这方面的实验研究已有较大的进展，尤其以日本和加拿大走在最前面，美国油脂化学协会亦十分关注PuFAs的生产和应用的研究进展。国际上开展PuFAs的微生物研究主要集中在以下几个方面：1、产PuFAs的菌种分离与选育；2、培养条件及发酵工艺的优化；3、培养方式的研究(包括批式、补料、连续培养工艺等)；4、PuFAs的分离纯化及结构鉴定。目前人们仅发现接合菌纲是唯一有前途的一个纲，而且普遍看好被孢霉，认为它是生产花生四烯酸、EPA,DHA的最佳菌种。国内方面，研究GLA并取得一定进展的有中科院上海植物生理研究所、南开大学、福建师范大学生物工程学院以及山东大学生命科学学院，但现在GLA的主要来源仍是从月见草等植物中提取的，利用微生物工业化生产GLA尚未见报道。华南理工大学报道了花生四烯酸的发酵研究。其种子培养基是：葡萄糖30g/1000mL、酵母膏2g/1000mL、蛋白胨3g/1000mL、K₂HPO₄ 0.5g/1000mL、CaCl₂.2H₂O 0.2g/1000mL、MgSO₄.7H₂O 0.3g/1000mL、pH6.0。其发酵培养基为：葡萄糖80g/1000ml,、酵母膏0.5g/1000mL、KNO₃ 40g/1000mL、K₂HPO₄3.0g/1000mL、CaCl₂.2H₂O 0.1g/1000ml,MgSO₄.7H₂O 0.5g/1000mL、FeCl₂·6H₂O 0.015g/1000mL、ZnSO₄·7H₂O 0.0075g/1000mL、CuSO₄·5H₂O 0.0005g/1000mL、pH6.0。其种子液制备如下：采用5ml无菌水将斜面菌种洗入装有50ml种子培养基的250ml三角瓶中，25℃、180rpm下摇瓶培养4天。其摇瓶发酵培养方法如下：取2ml种子液于装有50ml发酵培养基的250ml三角瓶中，25℃，180rpm下摇瓶培养7天。目前国内研究仍处在摇瓶实验阶段，尚未进行花生四烯酸的发酵罐放大培养，且花生四烯酸摇瓶发酵制配的最高得率为0.827g/1000mL。

本发明的目的在于提供了一种花生四烯酸发酵制配方法，工艺简便，制配方便，成本低，解决了花生四烯酸的发酵生产效率和产量低的问题。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案，在对培养基配方及花生四烯酸发酵条件进行反复实验的基础上，找到了花生四烯酸大量合成的培养基及发酵条件，其培养基成本低廉，取材容易，操作过程简单易行，其发酵制配方法如下：

1、种子扩大培养：

(1)豆芽汁的制备：新鲜黄豆芽400-600g，加水800-1200mL煮沸0.5-1.0小时，取出豆芽汁，备用。    

(2)种子培养基配方：采用豆芽汁800-1200mL，葡萄糖40-60g/1000mL，K₂HPO₄ 0.5-1.0g/1000mL,pH 6.0-6.5。

(3)种子培养条件：培养温度10-20℃，摇床转速为110-150rpm，培养3-5天。