[发明专利]一种新的人维生素B12相关蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肾上腺中表达的hCobW蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

钴胺素(cobalamin，Cob，即维生素B12)与维生素系列中的其他微量营养元素一样，在机体内特定生理过程起着其特定作用。钴胺素缺乏通常表现在血液反常上，比如巨红细胞贫血等等。(Semin Hematol 1999 Jan；36(1)：35-46)。另有报道称，在老龄化的人群里检测他们血清中Cob的含量，结果发现，Cob含量普遍偏低。研究发现，Cob缺乏将损害认知能力，是造成老年痴呆的一大原因。(Int J GeriatrPsychiatry 1998 Sep；13(9)：611-6)。    

本发明中，我们在人类肾上腺中克隆到Synechocystis sp.的一个钴胺素基因CobW的同源基因hCobW。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hCobW蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hCobW(Genbank AccessionNo.AF212253)，该基因是一个人hCobW蛋白基因。    

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hCobW。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hCobW蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hCobW蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hCobW蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第68-1198位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第68-1198位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第68-1198位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hCobW蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hCobW蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hCobW蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hCobW蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第68-1198位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hCobW蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hCobW蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hCobW蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第68-1198位的序列。

本发明还提供了与hCobW蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。