[发明专利]一种新的人辅酶Ⅰ亚基异构体蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肾上腺中表达的hND1a-iso蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

NADH脱氢酶(NADH dehydrogenase，NDs)由1、2、3、4、5等亚基组成，它们广泛参与了线粒体中各式各样的氧化还原反应。(Curr Genet 1999 Feb；35(1)：30-5)。近来的研究表明，ND1的突变还与糖尿病有关。(Biochem Biophys Res Commun1996 Feb 27；219(3)：951-5)。本发明中，我们在人类肾上腺中克隆到人NADH脱氢酶1号亚基a区(hND1a)的同源基因hND1a-iso。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hND1a-iso蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hND1a-iso(Genbank AccessionNo.AF164796)，该基因是一个人hND1a-iso蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hND1a-iso。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hND1a-iso蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hND1a-iso蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hND1a-iso蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第10-273位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第10-273位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第10-273位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hND1a-iso蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hND1a-iso蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hND1a-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hND1a-iso蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第10-273位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hND1a-iso蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hND1a-iso蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hND1a-iso蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第10-273位的序列。

本发明还提供了与hND1a-iso蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。

在本发明中，术语“人hND1a-iso蛋白(或多肽)编码序列”指编码具有人hND1a-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.6中第10-273位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQ ID NO.6序列的编码框第10-273位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.6中第10-273位核苷酸序列同源性低至约70％的简并序列也能编码出SEQ ID NO.7所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳的在高度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第10-273位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。该术语还包括与SEQ ID NO.6中从核苷酸第10-273位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％，最佳地至少95％的核苷酸序列。