[发明专利]一种新的人几丁质酶蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肝癌旁组织中表达的hchi-a蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

能够结合并降解不溶性的几丁质的几丁质酶(chitinase，chi)有许多种，构成了一个大的家族，其成员在绝大多数生物中均有发现。而在哺乳动物中，有报道称在动脉粥样硬化的血小板中曾检测到几丁质酶；在感染了曲霉的几内亚猪的血液里也有观察到几丁质酶量增高的记录。(J Biol Chem 2000 Jan 7；275(1)：514-20)。而在多种昆虫中，几丁质酶在它们的幼虫蜕皮成长过程中起着重要作用，这其中当然也包括了传播人类疟疾的按蚊(Anopheles gambiae)等等。(J Biol Chem 1997 Nov14；272(46)：28895-900)

本发明中，我们在人类肝癌旁组织中克隆到Aspergillus nidulans的几丁质酶chi-a基因的同源基因hchi-a。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hchi-a蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hchi-a(Genbank AccessionNo.AF212229)，该基因是一个人hchi-a蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hchi-a。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hchi-a蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hchi-a蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hchi-a蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第157-1338位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第157-1338位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第157-1338位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hchi-a蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hchi-a蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hchi-a蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hchi-a蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第157-1338位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hchi-a蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hchi-a蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hchi-a蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第157-1338位的序列。

本发明还提供了与hchi-a蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。