[发明专利]一种新的人磷酸三酯酶相关蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肝癌旁组织中表达的hPterp蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

有机磷复合物在哺乳动物体内的急性毒性机理是不可逆的抑制神经系统中的乙酰胆碱酯酶的活性，从而导致乙酰胆碱水平大大上升。磷酸三酯酶(phosphotriesterase)则能够水解这些具有神经毒性的有机磷酸酯类物质，比如对硝基苯磷酯(paraoxon，俗名一六零零)、甲氟磷酸异丙酯(sarin，俗名沙林)等。(Toxicology 1999 Jun 15；134(2-3)：169-78)。磷酸三酯酶同时也能够催化多种相关磷酸酯的水解反应，但是却不能催化磷酸二酯的水解。(J Biol Chem 1998 Jul10；273(28)：17445-50)。磷酸三酯酶的催化性能对底物的空间结构要求很高，因而其催化过程往往需要有磷酸三酯酶相关蛋白(phosphotriesterase related protein，Pterp)的参与。(Biochemistry 1999 Jan 26；38(4)：1159-65)。

本发明中，我们在人类肝癌旁组织中克隆到家鼠Pterp基因的同源基因hPterp。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hPterp蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hPterp(Genbank AccessionNo.AF212237)，该基因是一个人hPterp蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hPterp。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hPterp蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hPterp蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hPterp蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第134-1183位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第134-1183位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第134-1183位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hPterp蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hPterp蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hPterp蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hPterp蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第134-1183位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hPterp蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hPterp蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hPterp蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第134-1183位的序列。

本发明还提供了与hPterp蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。