[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白53和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白53，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

锌指结构域是核酸结合蛋白的结构，在许多核酸结合蛋白中发现含有该结构域，这些蛋白是DNA转录过程的调控因子。一个锌指结构域由25至30个氨基酸残基构成。C2H2锌指是典型的锌指结构域。其中两个保守的半胱氨酸及组氨酸都位于结构域的端部，与一个锌离子配位，其保守的序列模板为：#-X-C-X(1-5)-C-X3-#-X5-#-X2-H-X(3-6)-[H/C]，X代表任何氨基酸残基，#-代表那些对于锌指稳定折叠较为重要的残基。C2H2锌指由两条短的β链后接一个α螺旋构成。螺旋的N-端部分与结合锌指的DNA主沟结合。这样一个结构域约和5个核苷酸相互作用。在C2H2型锌指蛋白ZID(带有作用域的锌指蛋白)，Ttk,GAGA,ZF5以及一组痘病毒蛋白的氨基酸末端有一段保守的特征序列模板，这一区域被称为POZ(痘病毒及锌指)域或是BTB域。ZID,Ttk以及GAGA的POZ域抑制其与DNA相关的指区域的相互作用。这种抑制作用不依赖与和其他蛋白的相互作用，也不依赖于POZ域及指区域之间的特异性作用(Struhl,K.(1989)Trends Biochem.Sci.14:137^-140)。人体内有多种不同的C2H2型锌指蛋白，它们的序列是高度同源的，它们与DNA的特异性结合主要是位于α-螺旋中几个有限的位点间的区别。

另一种锌指蛋白为C2C2型，其中锌离子与四个半胱氨酸残基形成配位键。在这类蛋白中，如以H2代替C2，则失去了与DNA的结合能力。所有的C2C2型锌指蛋白中的锌指结构尽管对于DNA结合是必需的，但对结合的专一性并不重要。因而负责识别专一性的氨基酸序列必定存在于其他部位(Berg,J.M.(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.85:99^-102)。

在人体胎盘中发现有100多种与Kruppel蛋白有关的锌指蛋白。其中的人锌指蛋白83也是一种C2H2型锌指蛋白，该蛋白是DNA转录过程的调控因子，其中的C2H2连接域连接多指Kruppel蛋白中的指环(Bellefroid EJ et al.DNA 8(6),377^-387(1989))。

本发明的多肽与人锌指蛋白83在蛋白水平上有58％的同一性及70％的相似性，故认为本发明的新多肽与人锌指蛋白83具有形似的生物学功能，其分子量为53，因而被命名为人锌指蛋白53。该多肽及其抑制剂拮抗剂激动剂可用于诊断

防治与转录因子突变有关的癌肿或疾病，例如早幼粒细胞白血病，弥散性大细胞淋巴瘤等。

由于如上所述人锌指蛋白53蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白53蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白53蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白53以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白53的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白53的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人锌指蛋白53的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人锌指蛋白53的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人锌指蛋白53的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白53异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。