[发明专利]一种新的多肽——人二氢乳清酸酶13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人二氢乳清酸酶13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

二氢乳清酸酶(DHOase)，又称为氨甲酰天冬氨酸脱水酶，催化嘧啶生物合成的第三阶段的从头开始，使脲基琥珀酸(N-氨基甲酰-L-天冬氨酸)转化为二氢乳清酸。二氢乳清酸酶是极少数不用直接偶联例如ATP之类的能量即可生物合成一个氨基键催化反应的酶之一，催化了N-氨基甲酰-L-天冬氨酸的环化，这个催化反应还结合一个催化活性所必须的锌原子。

在细菌中，二氢乳清酸酶是由两条同样的400个氨基酸残基左右的长链组成的二聚物；在更高的真核生物中，二氢乳清酸酶是一个有多种功能的大蛋白的一部分；在果蝇、哺乳类中，它催化嘧啶生物合成的前三步。二氢乳清酸酶位于这个多聚蛋白的中心。在酵母中，二氢乳清酸酶由单功能蛋白基因(URA4)编码。然而，一个二氢乳清酸酶突变株发现了由多功能蛋白基因(URA2)编码，催化嘧啶合成的前两步。

有些代谢途径几乎在所有的器官中普遍存在，编码催化这些途径的酶的基因一定是古老的、重要的。嘧啶生物合成的从头开始途径就是这样一个例子。比较不同来源的二氢乳清酸酶氨基酸序列，发现两个高度保守序列。一个在N末端，含有两个组氨酸残基，被认为与结合锌原子有关；另一个在C-末端。我们建立了这两个区域信号模式。N末端的保守序列：D-[LIVMFYWSAP]-H-[LIVA]-H-[LIVF]-[RN]-x-[PGN]，其中，两个H可能是锌配位体的位点。C末端的保守序列：[GA]-[ST]-D-x-A-P-H-x(4)-K，适用除尿囊素酶以外的所有与二氢乳清酸酶有关酶。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人二氢乳清酸酶10的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人二氢乳清酸酶13。

由于如上所述人二氢乳清酸酶13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人二氢乳清酸酶13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人二氢乳清酸酶13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人二氢乳清酸酶13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人二氢乳清酸酶13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人二氢乳清酸酶13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人二氢乳清酸酶13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人二氢乳清酸酶13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人二氢乳清酸酶13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人二氢乳清酸酶13异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中933-1289位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1493位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。