[发明专利]一种新的多肽——人核糖体蛋白S3－12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人核糖体蛋白S3-12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

核糖体是真核或原核细胞蛋白翻译的场所。是由rRNA及蛋白组装而成。分为大小两个亚基。核糖体蛋白S3(RS3:ribosome protein s3)是位于核糖体小亚基上的一个组件，参与了翻译的起始。在真核细胞中，它能与与起始因子eIF-2及eIF-3交联，可能在翻译过程中直接参与了核糖体mRNA-氨基酰tRNA的相互作用。但除此以外RS3可能还有其它功能。在果蝇中，编码RS3的基因突变将产生一个隐性致命的表型和一个显性微小的表型。另外，人的小核RNA,U15A是由RS3的编码基因的内含子转录而成的。Pogue-Geile等人发现在直肠结肠癌细胞中，RS3是过度表达的。最后RS3蛋白还参与了DNA修复，这一功能也是近几年来研究的较多的一个功能。但仅见人和昆虫RS3蛋白的报道。1．RS3蛋白与DNA损伤修复：

电离辐射、化学致癌物、以及细胞代谢产生的氧自由基可造成DNA损伤。如果损伤不能及时修复，将随年龄增加不断积累，最终导致肿瘤及其它衰老相关疾病的发生。自由基造成的DNA损伤的主要产物是8-氧鸟苷酸(简称8-oxo-G)。它是氧压力下造成的高度突变的碱基修饰形式。这种碱基修饰形式的掺入会导致G-T转换。碱基切除修复是这类DNA损伤的主要修复形式。先通过N-糖基转移酶活性将突变的碱基从核苷酸链上释放出来，在局部形成一个无嘌呤/无嘧啶(AP:apurine/apyrimidine)位点。多数N-糖基化转移酶也有AP裂解酶的活性，通过β、δ消除反应切断磷酸二酯键，从而在局部形成一个核苷酸空缺，由DNA聚合酶来修补。最近研究发现果蝇的RS3蛋白在离体及在体情况下都有N-糖基转移酶和AP裂解酶的活性，能够修复损伤的DNA。在人的RS3蛋白也有同样的发现。2．RS3与突病的关系：  1)着色性干皮病是一种严重的遗传学疾病。患者由于AP内切核酸酶Ⅰ的编码基因缺失或突变，无法修复紫外线造成的损伤，在这种患者中，也未能检测到RS3的活性，虽然RS3的表达无显著变化。RS3蛋白在这种遗传病中的作用还有待于进一步研究。  2)Fancini’s贫血是一种具有发展为白血病和实性瘤的遗传性疾病。这类患者中8-oxo-G水平升高，而RS3减少，提示RS3的变化可能是Fanconi’s贫血的病因。  3)另外，还发现在腺瘤状息肉及结肠直肠癌中RS3表达增加。(同时增加的还有核糖体蛋白S6、S8、S12、L5、L25、L26。)由于一般认为腺瘤状息肉是结肠直肠癌癌前病变，提示核蛋白体的变化是恶变的早期事件。  就RS3蛋白总的功能来说，它既能修复DNA损伤，有参与蛋白的翻译。RS3蛋白具有核定位信号，而且它是在核内组装入前核糖体颗粒后进入胞浆的。在DNA损伤修复时，还可被重新募集入核。所以RS3蛋白的双重功能是有可能实现的。此外，如前所述RS3蛋白的编码基因的内含子转录产物为snRNA，提示RNA拼接与翻译的调节之间存在一定的关系。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人RS3蛋白13的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人核糖体蛋白S3-12。

由于如上所述人核糖体蛋白S3-12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人核糖体蛋白S3-12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人核糖体蛋白S3-12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人核糖体蛋白S3-12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人核糖体蛋白S3-12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人核糖体蛋白S3-12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人核糖体蛋白S3-12的方法。