[发明专利]一种新的多肽——人线粒体ATP酶耦合因子6－14和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人线粒体ATP酶耦合因子6-14，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

线粒体是真核细胞内一种重要的独特的细胞器，是细胞内的“动力站”。线粒体通过氧化磷酸化作用，进行一系列的能量转换，产生出大量ATP，提供细胞进行各种生命活动所需要的能量。电子从NADH传递到氧的过程中所释放的能量是ADP耦联磷酸化生成ATP的能量直接来源。在线粒体内，氧化和磷酸化同时进行并且密切地耦联在一起，其中的耦联因子是一些小颗粒，位于线粒体内膜的基质侧，其主要功能是使电子传递和磷酸化作用和谐地进行。线粒体ATPase耦联因子6(mitochondrial ATPase coupling factor 6)是线粒体ATP酶复合物的成员之一，是催化反应中交互作用所必须的组分。

目前已经分离得到人胎儿中的一种编码耦联因子6蛋白前体的cDNA，这段长度为497bp的cDNA包含一个96bp的区段，专门编码前体蛋白(含有108个氨基酸残基)中的前端32个氨基酸，该肽段可以作为信号肽起作用；在前体蛋白的3’-末端还存在一个140bp的区段，是非翻译区，其余的cDNA序列则编码成熟的含有76个氨基酸残基的耦联因子6蛋白(Javed从,Ogata K,Sanadi DR)。在各种哺乳动物中，线粒体ATPase耦联因子6的氨基酸序列是非常保守的。

线粒体ATPase耦联因子6是一种亲水性的蛋白，并且它的亲水性侧面在不同动物体中表现出非常相似的特征。寡霉素敏感性授予蛋白(Oligomycinsensitivity conferral protein)，在缺少耦联因子6的情况下，能够结合ATP酶到达线粒体的膜上，其表观缔合浓度为10(6)M-1，而结合了耦联因子6以后，获得的ATP酶的缔合浓度下降了1-2个数量级。寡霉素敏感性授予蛋白对鲁塔霉素敏感，而耦联因子6依赖的膜结合的ATP酶活性对于鲁塔霉素并不敏感。(Liang AM,Fisher RJ)。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人线粒体ATP酶耦合因子6-10的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人线粒体ATP酶耦合因子6-14。由于如上所述人线粒体ATP酶耦合因子6-14蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人线粒体ATP酶耦合因子6-14蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人线粒体ATP酶耦合因子6-14蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人线粒体ATP酶耦合因子6-14以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体ATP酶耦合因子6-14的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体ATP酶耦合因子6-14的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人线粒体ATP酶耦合因子6-14的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人线粒体ATP酶耦合因子6-14的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人线粒体ATP酶耦合因子6-14的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人线粒体ATP酶耦合因子6-14异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；