[发明专利]一种人免疫因子相关蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、免疫学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肝癌细胞中表达的hBop-m蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

CD8分子复合物是成熟T细胞表达的一簇糖蛋白，被认为是I类主要组织相容性复合物(class I major histocompatibility complex，MHC I)的受体分子之一。(Eur J Immunol 1988 Apr；18(4)：613-9)。而在CD8beta链的启动子上游600个核苷酸中，人们又发现了新的基因，其启动子引导转录的方向与CD8beta正好相反，于是命名为Bop(CD8b opposite，Bop)。进一步研究发现，Bop基因与CD8b“头碰头”排列，两者的表达是一致的，说明两者在相同的免疫功能途径中起作用。(Immunogenetics 1995；42(5)：353-61)。目前观察到Bop基因在多种组织中有表达，比如胸腺、心脏、骨骼肌等。(J Immunol 1997 Feb 1；158(3)：1165-74)。

本发明中，我们在人类肝癌细胞中克隆到家鼠骨骼肌中表达的Bop基因的同源基因hBop-m。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hBop-m蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hBop-m(Genbank AccessionNo.AF226053)，该基因是一个人hBop-m蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hBop-m。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hBop-m蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hBop-m蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hBop-m蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第4-1305位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第4-1305位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第4-1305位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hBop-m蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hBop-m蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hBop-m蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hBop-m蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第4-1305位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hBop-m蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hBop-m蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hBop-m蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第4-1305位的序列。

本发明还提供了与hBop-m蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。