[发明专利]一种新的多肽——人苹果酸脱氢酶MDH1－22和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人苹果酸脱氢酶MDH1-22，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

三羧酸循环(citri cacid cycle,TCA)几乎是所有需氧生物的能量代谢的中心环节，葡萄糖分解为丙酮酸后并不停留在这一阶段，而是进一步氧化，使丙酮酸中的碳原子最终被彻底氧化成二氧化碳。三羧酸循环是在一系列酶的催化下不断进行的，柠檬酸合成酶、乌头酸酶、异柠檬酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶等等。其中，苹果酸脱氢酶介导三羧酸循环中的脱羧作用，在三羧酸循环中，少量的草酰乙酸能够对多到任何所需数量的乙酰辅酶A进行氧化，其中涉及草酰乙酸的再生作用，它能够通过将苹果酸的羟基氧化成羰基而被再生，其中需要的三羧酸循环中的NAD/NADH协同因子系统来进行氢的转移。苹果酸脱氢酶完成了丙酮酸的羧化作用和还原作用。

苹果酸脱氢酶包括了两种形式的异构酶，一种存在于细胞质中(MDH1)，另一种存在于线粒体中，两种异构形式的酶都起了在细胞质和线粒体之间关键的相互转运作用，即苹果酸-天门冬氨酸盐的相互转运，从而保持了细胞内的物质代谢平衡。

为了研究MDH1的表达方式，我们建立了人多组织Northern-blot系统进行杂交实验(Clontech Laboratories,Inc.)。MDH1基因以组织特异性的方式进行表达，在心脏和骨骼肌中表达最为丰富，而在脑和肾脏中的表达量非常微弱，在其它的主要器官和组织中没有发现任何表达。这种特异性的表达和心脏以及骨骼肌的动力学特征并不矛盾，并且，这些组织需要大量的三羧酸循环所需要的酶。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人苹果酸脱氢酶MDH1的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人苹果酸脱氢酶MDH1-22。

由于如上所述人苹果酸脱氢酶MDH1-22蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人苹果酸脱氢酶MDH1-22蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人苹果酸脱氢酶MDH1-22蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人苹果酸脱氢酶MDH1-22以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人苹果酸脱氢酶MDH1-22的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人苹果酸脱氢酶MDH1-22的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人苹果酸脱氢酶MDH1-22的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人苹果酸脱氢酶MDH1-22的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人苹果酸脱氢酶MDH1-22的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人苹果酸脱氢酶MDH1-22异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中43-657位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1397位的序列。