[发明专利]一种新的多肽——人肾癌RAGE4抗原22和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人肾癌RAGE4抗原22，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在体内许多器官和组织中，发现一些能够编码与人类恶性肿瘤细胞结合的抗原的基因，其编码产生的抗原能够通过自体固有的细胞溶解型T淋巴细胞(autologous cytolytic T lymphocytes,CTL)实现特异性结合。在人类肾脏癌科细胞系中也找到了能够编码具有这种功能的抗原的基因，它们是组织特异性的，只能在肾脏中表达。

已经发现的肾脏中编码这类特异性抗原的基因很多，其中有一类RAGE相关基因，包括RAGE1、RAGE2、RAGE3、RAGE4。RAGE1能够编码LE9211-A抗原，另外三种RAGE与RAGE1的主要不同在于第249位上都含有一段37Bp的插入序列，而RAGE1没有；但是RAGE1在第191位上多了一个核苷。

RAGE4的cDNA比其它RAGE多了大约800个碱基，它的5’-末端序列与RAGE2相同，但是从434位到多聚A尾巴上的序列与其它RAGE基因的cDNA都不相同，由此可见，RAGE4的cDNA可能是由于RAGE2基因的选择性接合引起的。RAGE4的cDNA包括一个长的开放阅读框(ORF)以及一个起始密码子，编码一条含有187个氨基酸残基的蛋白，是RAGE4基因的主要产物。该蛋白含有若干段肽序列，能够结合到不同的HLA分子上。通过体外免疫实验还发现，这些肽序列具有另一项功能，即能够刺激正常个体的淋巴细胞，从而产生癌特异性CTL(Celis et al.,1994；Vander Bruggen et al.,1994)。

RAGE1能够编码LE9211-A抗原，将另外三个RAGE的cDNA与HLA-B7 cDNA共同转入到COS-7细胞中，发现它们并不具有与CTL263/17结合的性能。在RAGE1上，如果将37Bp的碱基插入，引起其第二阅读框的提前终止。

所有RAGE相关基因都是肾特异性的，它们编码的蛋白只能够在肾脏中表达，对于肾癌的研究和治疗具有相当重要的意义。癌抗原的分子水平的研究使采用已知抗原进行癌症治疗的免疫疗法成为可能。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人肾癌RAGE4抗原的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人肾癌RAGE4抗原22。

由于如上所述人肾癌RAGE4抗原22蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人肾癌RAGE4抗原22蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人肾癌RAGE4抗原22蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人肾癌RAGE4抗原22以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人肾癌RAGE4抗原22的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人肾癌RAGE4抗原22的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人肾癌RAGE4抗原22的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人肾癌RAGE4抗原22的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人肾癌RAGE4抗原22的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人肾癌RAGE4抗原22异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；