[发明专利]一种新的多肽——人alpha－连环蛋白相关蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

癌症的侵袭与转移是涉及细胞粘附特征中变化的一种复杂过程，它使得转化的细胞通过胞外基质(ECM)侵入并迁移，从而获得无贴壁依赖性生长特征(Liotta,L.A.,et al.,Cell 64:327-336(1991))。其中有些变化发生于粘着斑，后者是含有细胞膜相关的，细胞骨架及胞内信号分子的细胞/ECM接触点。钙粘蛋白是跨膜的细胞与细胞间的粘附受体，它对于脊椎动物的形态发生是至关重要的[Science,251,p1451-1455(1991)]。它们与皮层肌动蛋白维管束及在细胞与细胞边界上的其他细胞骨架蛋白协同定位，并由这些胞质蛋白调控作用[The EMBOJournal,7,p3679-3684(1988)]。这类蛋白包括属于粘着斑蛋白家族的连环蛋白，它直接与钙粘蛋白的胞质域连接[Cell Regulation,1,p37-44(1989)]。连环蛋白结合位点缺失的钙粘蛋白无法作为细胞与细胞粘附分子作用，尽管这些缺失的钙粘蛋白能在细胞表面表达。因而，连环蛋白在钙粘蛋白的功能中起到关键性作用。

连环蛋白根据其电泳迁移率可分为alpha,beta，以及gamma三类[The EMBOJournal,8,p1711-1717(1989)]。Alpha-连环蛋白与E-钙粘蛋白有关[Cell,65,p849-857(1991)]。该蛋白还与钙粘蛋白家族的其他成员相互作用，例如N-钙粘蛋白及P-钙粘蛋白。Alpha连环蛋白在各种表达不同钙粘蛋白的胚胎组织中表达。在这些组织中，胚胎脑中的alpha-连环蛋白表达相对较低[Cell,65,p849-857(1991)]。alpha-连环蛋白的序列与粘着斑蛋白五个区域中的三个显著相似：含有踝蛋白(膜下的一种细胞骨架蛋白)结合位点域，肌动蛋白结合域，以及粘着斑蛋白自我结合域。现有研究发现一种新的与alpha-连环蛋白相关的蛋白，它们在序列上有80％的同一性，新蛋白也与细胞骨架相互作用。与alpha-连环蛋白不同的是，该蛋白有48个残基的插入序列，与组织特异性交替剪切外显子有关，这一插入序列与Ⅰ型神经纤维瘤基因产物的片断相似，参与类似的细胞骨架作用。这种alpha-连环蛋白相关蛋白是粘着斑家族的新成员[JeanM.C.,Jean P.H.,Genomics 15,13-20(1993)]。

含有alpha-连环蛋白相关蛋白的多肽及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可被用于注射治疗由细胞与细胞粘附过程介导的疾病，例如原发性癌症，转移性癌症，自身免疫病，感染，皮肤疾病或是动脉粥样硬化还可治疗神经纤维瘤等疾病。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人alpha-连环蛋白相关蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人alpha-连环蛋白相关蛋白9。

由于如上所述人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人alpha-连环蛋白相关蛋白9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人alpha-连环蛋白相关蛋白9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人alpha-连环蛋白相关蛋白9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人alpha-连环蛋白相关蛋白9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人alpha-连环蛋白相关蛋白9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。