[发明专利]一种新的多肽——人胰岛素样生长因子结合蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人胰岛素样生长因子结合蛋白9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

胰岛素样生长因子(IGF)是一低分子量的多肽激素，与胰岛素原在结构上具有较高的同源性。在生物体已发现存在两种不同的胰岛素样生长因子：IGFⅠ及IGFⅡ，它们作为一种促有丝分裂因子，在生物体的各种组织及细胞中均有表达。IGFⅠ在个体生长的软骨发育及骨骼形成过程中起重要的调节作用；而IGFⅡ则在胚胎发育及神经发育生长过程中起重要的调节作用。研究发现，胰岛素样生长因子不仅在骨骼发育过程中起重要的作用，其还在组织重建如红血球生成、生长激素缺失的肌体生长及肝、肾等组织的发育及作用过程中起重要的调节作用。该蛋白的突变或表达异常通常与体内一些骨质疏松症等疾病的发生密切相关。

胰岛素样生长因子在生物体内的作用至少需要一种IGF结合蛋白的协同作用，IGF结合蛋白在体内可能介导胰岛素样生长因子在特定组织的正确定位与表达。该类结合蛋白在体内可用于治疗因生长因子表达过量所引起的组织生长过度等疾病。其与相应的生长因子协同作用，以调控体内各相关组织及细胞的正常发育与生长。

人们最早克隆得到的胰岛素样生长因子结合蛋白是IGFBP-3，该蛋白是一约150KDa大、由多个亚单位组成的糖蛋白，其是一种生长激素依赖的结合蛋白，在体内的表达受激素含量的调控。1984年，Povoa等人从人及鼠的羊膜组织中克隆得到了一新的胰岛素样生长因子结合蛋白IGFBP-1，这两种不同生物来源的结合蛋白，其氨基酸序列具有较高的同源性[Povoa G.et al.,1984,Eur J.Biochem,144:199]。1988年，Lee等人又从人肝细胞瘤G2细胞株中克隆得到了一胰岛素样生长因子结合蛋白，该结合蛋白约由234个氨基酸残基组成，且含有一富含半胱氨酸残基的序列片段，该蛋白的氨基酸序列与已知的几个胰岛素样生长因子结合蛋白均具有较高的同源性，且该蛋白亦在生物体内亦参与调控相应的胰岛素样生长因子发挥其正常的生理学活性，以促进相关组织及细胞的生长、发育及其作用[Lee Y.L.,Hintz R.L.et al.,1988,Mol Endocrinol,2:404-411]。

由上可知，胰岛素样生长因子结合蛋白与相应的生长因子在体内协同作用，调控着胰岛素样生长因子在组织及细胞内的正常表达及作用。该蛋白的突变或表达异常将导致体内胰岛素样生长因子的表达与作用异常，进而引发各种与之相关的代谢及发育紊乱性疾病。该蛋白在生物体内与各种相关组织的代谢紊乱性疾病、骨骼疏松症、软骨病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种疾病。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人胰岛素样生长因子结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人胰岛素样生长因子结合蛋白9。由于如上所述人胰岛素样生长因子结合蛋白9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人胰岛素样生长因子结合蛋白9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人胰岛素样生长因子结合蛋白9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人胰岛素样生长因子结合蛋白9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人胰岛素样生长因子结合蛋白9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人胰岛素样生长因子结合蛋白9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人胰岛素样生长因子结合蛋白9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人胰岛素样生长因子结合蛋白9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人胰岛素样生长因子结合蛋白9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。