[发明专利]一种新的多肽——中枢大麻受体10和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--中枢大麻受体10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

大麻的主要药理学活性成分是Δ⁹-四氢大麻醇--一种内源的兴奋剂，大麻受体存在于一些组织细胞的膜上，能够与大麻相关成分进行特异性结合，使细胞作出反应，从而产生兴奋。目前已经分别从鼠和人的大脑组织中得到了能够编码大麻受体的部分cDNA序列(Matsuda,L.A.,Lolait,et al.,1990)。人类大麻受体蛋白包含472个氨基酸残基，其中含有7个高度疏水区域，属于较为典型的G蛋白耦联受体超家族。

大麻受体的主要成分是CB1，介导百日咳毒素敏感的GTP结合调节蛋白依赖的腺苷酰酶的抑制作用和N型Ca离子通道的抑制作用。(Mackie,K.,and Hille,B.,1992)。CB1及其mRNA最多存在于脑中，通过PCR也在外周组织中检测到。全长成熟编码区通过翻译可以得到一个CB1的缩短了的、末端氨基修饰的形式，并把它命名为CB1A。一种拮抗药分子SR 141716A能够特异性以高度的亲合力与中枢大麻受体相结合，这些特殊的配体对于各种大麻受体的结构和生理意义的深入研究起到了重要的促进作用(Rinaldi-Carmona,M.,Barth,F.,Héaulme,M.,et al.)。

中枢大麻受体结构上的主要不同存在于其位于细胞外的长末端区域，该区段能够进行选择性切割，从而产生不同结构的受体。CB1 mRNA在氨基末端编码区域存在的两种不同形式。中枢大麻受体基因除了小编码区内含子以外，在人类该基因起始密码子的上游区域发现了一个巨大的内含子，至少有1.8Kb的长度。

大多数小的非肽分子有小的氨基末端区域和配基结合位点，由七螺旋状的跨膜区域形成的口袋结构构成。(Frielle,T.,Daniel,K.W.,et al.,1988)。所有已知的大麻醇，包括内生配体，都是无肽的小分子，在中国大颊鼠类的卵巢细胞的表达中，我们发现被修饰了的CB1A和CB1在配体结合属性上有些不同。在CB1中有三个蛋白糖基化位点，但是由于不同的接合形成的CB1A缺少了其中的两个。研究发现，蛋白糖基化对于信号转导和亚细胞分配的指导具有非常重要作用。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与中枢大麻受体的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为中枢大麻受体10。

由于如上所述中枢大麻受体10蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的中枢大麻受体10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新中枢大麻受体10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--中枢大麻受体10以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码中枢大麻受体10的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码中枢大麻受体10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产中枢大麻受体10的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--中枢大麻受体10的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--中枢大麻受体10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与中枢大麻受体10异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；