[发明专利]一种新的多肽——人beta－微管蛋白折叠辅因子C－9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

微管是细胞骨架必需且普遍存在的成分，它们的丝状排列与不同的生物功能有关，包括细胞分裂，胞内转运，以及维持细胞构架。微管由微管蛋白异源二聚体，一条α-及一条β-微管蛋白多肽组装而成。转录后形成微管蛋白异源二聚体的第一步是折叠新合成的α-及β-微管蛋白多肽为天然构像。微管蛋白对于酶机制转化ATP水解成为分子沿微管移动是极为重要的。beta-微管蛋白的C-端与驱动蛋白传动器作用以调控微管聚合作用，运动以及药物敏感性(Ranganathan etal.,1997,Prostate 30:263-268；Tucker and Goldstein,1997,J.Biol.Chem.272:9481-9488)。这种功能具有致病生理学上的意义；Ⅳ型beta-微管蛋白在前列腺癌中高度表达，而Ⅱ型beta-微管蛋白在恶性腺癌中被正调节(Ranganathan et al.,1997,Prostate 30:263-268)。微管通过beta-微管蛋白与含Src同源2(SH2)域的蛋白结合，在装配涉及细胞转化的信号分子复合物中起重要作用(Itoh et al.,1996,J.Biol.Chem.217:27931-27935)。综上所述，beta-微管蛋白在肿瘤发生，进行性肿瘤，细胞结构以及胞内蛋白转运，细胞分化以及胞内信号中起作用。因而beta-微管蛋白可用于治疗特定的癌症与疾病例如自身免疫疾病以及神经变性疾病。

通过依赖ATP的与胞质陪伴蛋白作用产生的beta-微管蛋白折叠中间体与四种蛋白(辅因子A,D,E，以及C)连续进行反应。级联反应中的后陪伴蛋白步骤不依赖ATP或GTP水解，尽管GTP在微管蛋白折叠中起到构架的作用。辅因子A与D通过在准天然的构像中捕捉及固定beta-微管蛋白行使功能。辅因子E与辅因子D-beta-微管蛋白复合物结合；与辅因子C作用然后释放天然状态的beta-微管蛋白多肽。beta-微管蛋白折叠辅因子C作为伴侣蛋白作用，它可防止在β-微管蛋白亚基暴露的疏水面上发生不正确反应，或是通过提升靶蛋白越过一个或多个特异性动力障碍以完成正确的折叠(Guoling T.,Yi H.,1996 Cell 86,287-296)。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人beta-微管蛋白折叠辅因子C的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9。

由于如上所述人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中-直需要鉴定更多参与这些过程的人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人beta-微管蛋白折叠辅因子C-9异常相关的疾病的方法。