[发明专利]一种新的多肽——N－乙酰半乳糖胺转移酶－28和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--N-乙酰半乳糖胺转移酶-28，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

O-糖苷键(粘蛋白-型)连接的寡糖分布于众多不同类型的糖蛋白中[Sadler,J.E.John Wiley&Sons.1984.Biology of Carbohydrates Vol.2,pp.199-213]该类型的寡糖功能非常多样化，从特异性很强的寡糖功能，如参与细胞与细胞识别和寄主性病原体反应，到非常普通的寡糖功能，如保护蛋白质防止它的水解或为黏液分泌性蛋白提供合适的电荷与水结合环境[Jentoft,N.1990.TrendsBiochem.Sci.15,291-294]。

O-糖苷键连接寡糖合成的起始反应是将一个N-乙酰半乳糖鞍基团从核苷糖UDP-N-乙酰半乳糖胺转移到蛋白质受体的一个丝氨酸或一个苏氨酸残基上。该反应的催化酶是多肽N-乙酰半乳糖胺转移酶(UDP-GalNAc)，这个酶是位于分泌途径的细胞内酶。最近生物学家从牛中克隆出了N-乙酰半乳糖胺转移酶，该酶属于类型Ⅱ膜蛋白，并同样包含了其他半乳糖转移酶的一般结构域。该酶的氨基酸序列包含3个一致序列作为N连接的糖基化位点。由于N-乙酰半乳糖胺转移酶缺乏N末端40个氨基酸的膜结合片段和一个包括细胞质和跨膜结构域的序列片段，N-乙酰半乳糖胺转移酶在水中是可溶的[Fred L.Homa,Tameira Hollander,Donna J.et al.,1993.The Journal ofBiological Chemistry268,12609-12616]。

N-乙酰半乳糖胺转移酶的精确定位还存在着争议。有人认为N-乙酰半乳糖在受体蛋白上的起始结合发生于前糙面内质网。而有的科学家则认为该结合是发生于后内质网组分或高尔基体顺面的的后翻译事件。现在有证据表明，将N-乙酰半乳糖胺转运至丝氨酸或苏氨酸的反应可能发生于分泌途径的几个相隔区域[Schachter,H.,andBrockhausen,Ⅰ.1992.MarceL Dekker,Inc.,New York263-332]。

本发明人的多肽与N-乙酰半乳糖胺转移酶在蛋白质水平上有34％的相同性和58％的相似性，具有与N-乙酰半乳糖胺转移酶相似的结构特征，属于N-乙酰半乳糖胺转移酶家族，故命名为N-乙酰半乳糖胺转移酶-28，同时推测其具有相似的生物学功能。

由于如上所述N-乙酰半乳糖胺转移酶-28蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的N-乙酰半乳糖胺转移酶-28蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新N-乙酰半乳糖胺转移酶-28蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--N-乙酰半乳糖胺转移酶-28以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码N-乙酰半乳糖胺转移酶-28的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码N-乙酰半乳糖胺转移酶-28的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产N-乙酰半乳糖胺转移酶-28的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--N-乙酰半乳糖胺转移酶-28的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--N-乙酰半乳糖胺转移酶-28的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与N-乙酰半乳糖胺转移酶-28异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。