[发明专利]一种新的多肽——钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

钠泵(Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶)，位于所有动物细胞的质膜中(Horisberger J.D.,Lemas V.,Krahenbul J.P.,Rossier B.C.,Annu.Rev.Physiol.53:565-584(1991))，是一种催化亚基(alpha链)，一种约为34Kd(beta链)的糖蛋白亚基以及一种约为6Kd小的疏水蛋白的异源三聚体，它是主要的离子动势腺苷三磷酸酶，它伴随腺苷三磷酸分子中所含的自由能转运Na⁺及K⁺穿过胞质膜。

Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶中的beta亚基是具有组织特异性的糖蛋白，它通过组装alpha/beta异源二聚体，调控转运至质膜的钠泵数量(McDonough A.A.,Gerring K.,Farley R.A.,FASEB J.4:1598-1605(1990))。Beta亚基在结构上由约35各残基的带电荷胞质域构成，后接一个跨膜域，与一个含有三个二硫键及糖基化位点的大的胞外域。现已知beta亚基的两种同种型：beta-1及beta-2，它们具有50％的序列同一性。胃(K⁺,H⁺)腺苷三磷酸酶(质子泵)与胃酸产生有关，它由两个亚基构成，其beta链与钠泵beta亚基高度同源。Beta亚基由两个保守的特征序列模板：[FYW]-x(2)-[FYW]-x-[FYW]-[DN]-x(6)-[LIVM]-G-R-T-x(3)-W，位于胞质域，而第二个位于胞外域并含有参与形成二硫键的两个半胱氨酸：[RK]-x(2)-C-[RKQWI]-x(5)-L-x(2)-C-[SA]-G。beta亚基还具有阳离子转运能力以及乌本(箭毒)苷结合能力。

在许多可兴奋细胞中，钠通道是负责由最初动作电位去极化而增加初始的钠通透性，这些可兴奋细胞包括肌肉，神经，以及心脏细胞。心脏钠通道尤其与刺激与传导心肌细胞中的动作电位有关(Fozzard,H.A.,et al.,Circ.Res.,56:475-485(1985))。Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶广泛存在于所有的细胞中确保了对细胞容积的重要控制并维持了通过细胞膜的Na⁺,K⁺梯度。Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶在上皮细胞基底外侧膜的不对称分布使得盐和水可自细胞层一侧向量转运(正如在肾及肠中所进行的)，从而控制胞外容积以及胞内胞外区室间的渗透平衡。在可兴奋细胞中，Na⁺,K⁺腺苷三磷酸酶对于控制膜电位是至关重要的，因而与组织的可兴奋性密切相关。

本发明的多肽与钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基家族成员具有相同的特征序列模板，并有相似的生物学功能，故而认为该蛋白是钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基家族的新成员。该多肽及其抑制剂，激动剂，拮抗剂可用与诊断，防治自身免疫性胃炎等疾病，还可作为抗心律不齐药物以及强心剂。

由于如上所述钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--钠与钾腺苷三磷酸酶beta亚基10的抗体。