[发明专利]一种新的多肽——帕内特细胞分泌蛋白42和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——帕内特细胞分泌蛋白42，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞增殖，分化，迁移以及其生理特性都显示沿小肠上皮细胞的小囊-绒毛轴具有高度的空间组成，而基因表达与这种组成平行。上皮干细胞位于小囊基底，因而其相关基因也在小囊基底表达。干细胞迁移出小囊基底并沿下述四种上皮细胞系被诱导分化：柱状细胞，粘液细胞，肠内分泌细胞，帕内特细胞。柱状细胞，粘液细胞，肠内分泌细胞系中的多数细胞沿小囊向上迁移至绒毛上皮细胞，而帕内特细胞系的细胞则是向下迁移至小囊基底，其相关基因也是在小囊基底表达。

帕内特细胞是活性的分泌细胞，是一种肠腺的嗜酸性细胞，它合成类似EGF的生长因子以及增强型因子；类似鸟苷蛋白，防卫素(动物细胞的内源性抗菌肽)-5以及溶菌酶的抗微生物剂；其他类似alpha1-抗胰蛋白酶，肿瘤坏死因子以及角蛋白21。帕内特细胞的基因在肝脏中以及胃肠道的各处表达，倘若这种细胞发生变异或缺失则会引起各种癌肿(Cheng H,Bjerknes M,Anat Rec 1996Jan；244(1):78-94)。

本发明的多肽与鼠帕内特细胞分泌蛋白在蛋白水平上有89％的同一性及92％的相似性，且具有相似的生物学功能，因而被认为属于帕内特细胞的一种，命名为帕内特细胞分泌蛋白42。该多肽及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可用于诊断兼防治各种癌肿，例如前列腺癌等疾病(Bonkhoff and Remberger,Prostate28:98-106(1996)；Bonkhoff(1996))。

由于如上所述帕内特细胞分泌蛋白42蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的帕内特细胞分泌蛋白42蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新帕内特细胞分泌蛋白42蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——帕内特细胞分泌蛋白42以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码帕内特细胞分泌蛋白42的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码帕内特细胞分泌蛋白42的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产帕内特细胞分泌蛋白42的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——帕内特细胞分泌蛋白42的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——帕内特细胞分泌蛋白42的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与帕内特细胞分泌蛋白42异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少90％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中20-1165位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1691位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制帕内特细胞分泌蛋白42蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。

本发明还涉及一种体外检测与帕内特细胞分泌蛋白42蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本发明多肽的量或生物活性。