[发明专利]一种新的多肽——人自然死亡细胞增强因子B13.64和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人自然死亡细胞增强因子B13.64，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

一类细胞溶质因子，该因子被称之为细胞自然死亡增强因子，在生物体内起着增强细胞自然死亡活性的作用。该蛋白由两个分子量相同的亚单位组成，两个亚单位之间由二硫键连接，两者在生物体内协同作用，以发挥蛋白的生物体内作用活性。

众所周知，细胞自然死亡是生物体内细胞代谢生长的一种正常的生理现象，是生物体内各组织器官正常生长发育的一种重要的自我调控过程。细胞主动发生的自然死亡过程，是平衡细胞增殖，调节机体细胞数量恒定的一种重要方式。起在生物体内主动清除多余的特异性或分化能力与机体不相适应的及已完成功能而又不再应用的细胞。该调控过程的失败或异常通常将导致机体疾病、畸形甚至死亡。

1994年，Hungyi等人从人中克隆得到了两个细胞自然死亡增强因子---NKEFA及NKEFB，两者均在生物体内调控着细胞自然死亡过程的正常进行。这两个蛋白因子均为细胞溶质蛋白，由两个大小等同的亚单位组成，两者的蛋白序列中含有多个保守的磷酸化位点。研究发现，从原核生物到哺乳动物体内均含有各种细胞自然死亡增强因子，且不同来源的增强因子均具有较高的同源性，特别是这些蛋白的氨基酸序列中均含有多个保守的功能性结构基序。这些细胞自然死亡增强因子在生物体内的作用活性可能与细胞氧化强度相关，在一定的氧化强度下促进细胞的自然死亡，该蛋白因子在体内阻止癌症发生的过程中起着重要的调控作用，其突变或表达异常将导致相关细胞的异常增殖或过度死亡，进而引发各种相关的疾病[Hungyi Shau,Lisa H.Butterfield et al.,1994,Immunogenetics,40:129-134]。

由上可知，细胞自然死亡增强因子在生物体细胞代谢与发育过程中起着重要的调控作用，其平衡着体内细胞的增殖，调节细胞机体细胞数量保持恒定。该蛋白的突变或表达异常将导致体内细胞自然死亡过程的异常，即引起相关细胞的异常增殖或过度死亡，进而引发各种相关的疾病。该蛋白在生物体内通常与一些相关的发育、代谢紊乱性疾病、相关阻止的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人自然死亡细胞增强因子的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人自然死亡细胞增强因子B13.64。

由于如上所述人自然死亡细胞增强因子B13.64蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人自然死亡细胞增强因子B13.64蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人自然死亡细胞增强因子B13.64蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人自然死亡细胞增强因子B13.64以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人自然死亡细胞增强因子B13.64的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人自然死亡细胞增强因子B13.64的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人自然死亡细胞增强因子B13.64的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人自然死亡细胞增强因子B13.64的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人自然死亡细胞增强因子B13.64的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人自然死亡细胞增强因子B13.64异常相关的疾病的方法。