[发明专利]一种新的多肽——中心体Nek－2结合蛋白110.12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--中心体Nek-2结合蛋白110.12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

体在一百年前就已经受到关注了，中心体结构和功能的调节都与细胞周期紧密相关(Mazia,1987；Kellogg et al.,1994；Tournier and Bornens,1994)，目前已经得到了许多中心体相关的组分。其中Nek2就是其中之一，它属于哺乳动物细胞周期调节激酶，在结构上与构巢曲霉菌的有丝分裂调节器NIMA相似(Fryand Nigg,1995；Lu and Hunter,1995a；Osmani and Ye,1996)。中心体的Nek-2结合蛋白1(centrosomal Nek2-associated protein 1,C-Nap1)是一种人类中心体蛋白，其羧基末端能够与Nek2发生作用，因此最初被称为Nek2相互作用蛋白，它是哺乳动物中心体的核心组分。

C-Nap1是一种高分子量(281Kd)的卷曲螺旋蛋白，其结构上含有很长的卷曲螺旋区域，在区域的中心有一个铰链区。只在C-Nap1氨基和羧基的末端和中心区域附近发现有打破螺旋结构的Pro残基簇，但并不影响整个结构上的卷曲螺旋。一些其它的中心体蛋白也发现含有类似的卷曲螺旋区域存在(Stearn andWiney,1997)，表明蛋白之间的相互作用离不开该区域，并且中心体结构的保持也有赖于此。与Nek2相似，C-Nap1也能够独立地与中心体相结合，而并不依赖于微管的存在，因此它也属于中心体的核心组分(Oegema et al.,1995)。

在人类细胞中，Nek2能够与中心体相结合，它在减数分裂中染色质的浓缩阶段起作用(Rhee and Wolgemuth,1997)，但是，Nek2的超表达却并不有利于染色质的浓缩，反而影响中心粒之间的粘连，并且能够引起明显的中心体分裂现象。C-Nap1是Nek2的磷酸化底物，不论在体外还是在活细胞中，其羧基端都能够被Nek2磷酸化。

Nek2的表达是组织特异性的，能够在睾丸中大量表达，在精子发生阶段上显示出一种特异性的表达方式(Rhee and Wolgemuth,1997；Tanaka et al.,1997)。然而，C-Nap1的表达却是广泛的，在所有的组织细胞中都发现有相当的表达，包括在睾丸中，但是其表达水平却是很低量的，甚至只有几个拷贝。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与中心体Nek-2结合蛋白1的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为中心体Nek-2结合蛋白110.12。

由于如上所述中心体Nek-2结合蛋白110.12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的中心体Nek-2结合蛋白110.12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新中心体Nek-2结合蛋白110.12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--中心体Nek-2结合蛋白110.12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码中心体Nek-2结合蛋白110.12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码中心体Nek-2结合蛋白110.12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产中心体Nek-2结合蛋白110.12的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--中心体Nek-2结合蛋白110.12的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--中心体Nek-2结合蛋白110.12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与中心体Nek-2结合蛋白110.12异常相关的疾病的方法。