[发明专利]一种新的多肽——人视网膜瘤结合蛋白23和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人视网膜瘤结合蛋白23，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

视网膜瘤(RB)蛋白在正常细胞的增殖和分化中有重要作用。细胞的分裂需要细胞经过细胞周期中的多个阶段。RB被认为可以通过将细胞维持在细胞周期的G1和G0阶段而抑制细胞分裂[Weintraub SJ et al.Nature 1995；375:812-5]。

RB能够控制细胞生长。对于一些因为RB的作用而停止生长的组织，可以利用这一特性刺激其生长。例如：心肌组织由于细胞死亡失去功能可以通过活细胞的增殖得以修复。因此，阻断RB的细胞控制功能能够帮助诱导心肌或神经细胞死亡情况下的组织修复[Wiman KG.FASEB J 1993；7:841-5]。

RB的失活能导致癌细胞的异常生长，因此RB是一种被广泛研究的肿瘤抑制基因。这种失活可以是突变产生的，也可以是由于结合了一种病毒性原癌蛋白(一种原癌病毒的产物)而导致失活。这种失活发生在RB蛋白的一种特定区域，该区域在生长控制方面很重要，被称为“RB口袋区”。许多因子包括病毒性原癌蛋白，都可以与RB口袋区结合控制RB蛋白的功能。发现与RB结合的蛋白结合因子可助于寻找到一些新方法以控制疾病状态下RB介导的细胞增殖和分化，这些疾病包括(但不限于)心脏和神经功能丧失或恶性肿瘤的发生等。因此，有必要寻找新的结合并调控RB的蛋白因子。本发明提供了一种新的RB结合蛋白满足了这方面的要求。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人视网膜瘤结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人视网膜瘤结合蛋白23。

由于如上所述人视网膜瘤结合蛋白23蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人视网膜瘤结合蛋白23蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人视网膜瘤结合蛋白23蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人视网膜瘤结合蛋白23以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人视网膜瘤结合蛋白23的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人视网膜瘤结合蛋白23的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人视网膜瘤结合蛋白23的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人视网膜瘤结合蛋白23的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人视网膜瘤结合蛋白23的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人视网膜瘤结合蛋白23异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中218-844位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1265位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。