[发明专利]一种新的多肽——人糖基水解酶23和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人糖基水解酶23，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在生物体内存在大量糖基水解酶，按这些酶氨基酸序列的相似性可将这些酶分为35个不同的蛋白家族。其中18个酶家族的成员为单体特异的，即含有单一的EC；而另17个酶家族的成员为聚合特异的，即含有至少两个以上的EC。这些在生物体内均参与各种糖代谢调控过程[Henrissat B.,1991,Biochem J,280:309-316]。

研究发现，真菌中的菊糖酶、真菌和植物中的呋喃果糖糖苷酶、大肠杆菌中的棉子糖重组酶及枯草芽孢杆菌中的果聚糖酶等均为同一糖基水解酶家族32的成员，具有相似的序列特征。该酶家族的成员均在生物体内调节着各种相关的糖代谢功能，其中有些酶直接参与代谢调节过程，而另一些则可能通过调节一些糖代谢中间物的构型及活性来调节生物体内的糖代谢过程。因而，该家族的成员在生物体内糖代谢过程中起着极为重要的作用。

所有该糖基水解酶家族的成员，其蛋白序列的N末端均含有一保守的序列区域，该区域含有一天冬酰胺残基，在酵母中该氨基酸残基位点在催化机制中起着十分重要的作用。这一保守区域由如下所示的一致性序列片段组成：H-X(2)-P-X(4)-[LIVM]-N-D-P-N-G；其中D为活性位点氨基酸残基。该序列片段是糖基水解的催化活性中心，其突变将导致酶蛋白的表达异常或失活，从而影响与之相关的生物体内糖代谢过程。该糖基水解酶家族的成员在生物体内参与各种重要的糖代谢过程，其表达异常通常与生物体内一些相关的糖代谢紊乱症及物质代谢紊乱症等疾病的发生密切相关。

本发明的多肽被推断鉴定为人糖基水解酶23。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人糖基水解酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人糖基水解酶23。

由于如上所述人糖基水解酶23蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人糖基水解酶23蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人糖基水解酶23蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人糖基水解酶23以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人糖基水解酶23的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人糖基水解酶23的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人糖基水解酶23的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人糖基水解酶23的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人糖基水解酶23的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人糖基水解酶23异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中77-694位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1272位的序列。